【摘 要】
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目的 探讨转化生长因子β诱导蛋白(TGFBI)基因调控人脐带来源间充质干细胞(huc-MSC)的成骨分化作用.方法 培养huc-MSC,流式细胞术检测细胞表面标志物CD14、CD34、CD45、CD73
【机 构】
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天津医科大学总医院儿科,天津 300052;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京 100850;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京,100850;天津医科大学总医院儿科,天津,300
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目的 探讨转化生长因子β诱导蛋白(TGFBI)基因调控人脐带来源间充质干细胞(huc-MSC)的成骨分化作用.方法 培养huc-MSC,流式细胞术检测细胞表面标志物CD14、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105,油红O染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测体外成脂肪细胞和成骨细胞的诱导分化能力,实时荧光定量PCR(q-PCR)检测成脂和成骨关键转录因子的表达.采用si-RNA瞬时转染技术敲低huc-MSC的TGFBI基因,并研究其对huc-MSC生物学特性的影响;进一步利用慢病毒载体构建稳定敲低TGFBI基因的huc-MSC(TGFBI-/-huc-MSC),并对TGFBI-/--huc-MSC进行成骨细胞诱导分化,ALP染色鉴定细胞ALP活性,q-PCR检测成骨分化关键转录因子ALP及骨桥蛋白(OPN)的表达差异.结果 培养的huc-MSC表达MSC表面标志物CD14-CD34-CD45-CD73+CD90+CD105+,TGFBI基因敲低后不影响huc-MSC表面标志物的表达;成脂肪诱导分化后,出现大量红色脂滴,成脂分化关键转录因子Adi和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)表达显著增加(P<0.001);成骨诱导分化后,ALP活性增加,成骨分化关键转录因子OPN和ALP表达亦显著增加(P<0.001),证明敲低TGFBI基因的huc-MSC仍具有向成脂、成骨分化的特性,但其成骨诱导分化能力较未敲除组增强,其中ALP活性、ALP基因(P<0.001)及OPN基因(P<0.001)的表达均显著增高.结论 TGFBI基因能抑制huc-MSC的成骨分化.
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