目的:结合多重连接依赖探针扩增(MLPA)和荧光探针溶解曲线分析技术,建立一种一管法同时检测并分辨15种高危型HPV的方法。方法:根据各HPV亚型的特异性序列设计MLPA探针,并在各亚型的MLPA探针中加入溶解温度(Tm)不同的人工核酸序列作为识别标志;使用特殊的耐高温连接酶和热启动Taq酶,通过温度控制使探针杂交、连接、PCR在一管反应中顺序进行;以各HPV亚型102拷贝至106拷贝的标准品质粒作为模版进行敏感度实验;将102~106拷贝的HPV亚型标准品进行两两混合作为模版,检测本方法对混合样本的检测能力;使用本方法和HPV分型试剂盒(导流杂交法)对临床样本进行平行检测,比较2种方法的差异。结果:本方法可在一次反应内顺序完成MLPA探针杂交、连接、扩增3个步骤,扩增结果可通过不同荧光通道不同Tm值的溶解峰分辨不同的HPV亚型;本方法对标准品的检测灵敏度比经典的MLPA 3步法反应下降约一个数量级;本方法可同时检测至少2种HPV亚型的混合感染;对临床阳性标本的检出率与导流杂交法结果基本一致。结论:本研究成功建立了一种利用一管法MLPA荧光探针溶解曲线技术检测15种高危型HPV的方法。