【摘 要】
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口腔癌缺失(Deleted in Oral Cancer-1,DOC-1)基因是近年来被证实的口腔癌中具有抑癌作用的基因.1999年,研究人员通过酵母双杂交实验又发现了与DOC-1相关的另一候选抑癌基因D
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口腔癌缺失(Deleted in Oral Cancer-1,DOC-1)基因是近年来被证实的口腔癌中具有抑癌作用的基因.1999年,研究人员通过酵母双杂交实验又发现了与DOC-1相关的另一候选抑癌基因DOC-1R(DOC-1 related).以往的很多实验表明,这两个蛋白无论序列还是功能上都非常相似.然而,其三维结构以及与其他重要蛋白相互作用的机制一直还不清楚,PDB库中也未见其相关同源结构的报道.作者将人DOC-1R基因的cDNA片段克隆至原核表达载体pET-22b(+)中,通过IPTG诱导获得高效表达,再经过Ni-NTA亲和层析和Superdex 75层析柱纯化,获得了纯度达到96%以上的蛋白.质谱分子量测定显示DOC-1R的分子量为14091.23 Da,与理论分子量基本一致;动态光散射实验显示蛋白均一性高达99.0%,可用于晶体生长;采用悬滴气相扩散法筛选,在多个条件下得到了DOC-1R的微晶.为DOC-1R的三维结构解析奠定了坚实的基础.
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