【摘 要】
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目的:淡豆豉广泛应用于治疗流感的方剂中,本研究旨在结合网络药理学和细胞实验初步探讨淡豆豉抗流感病毒作用方式、物质基础和分子生物学基础。方法:通过TCMSP和TCM-ID数据库获取淡豆豉中的活性成分,借助PharmMapper数据库和Swiss target predication数据库获取活性成分靶点信息。在GeneCards和DisGeNET数据库获取流感相关靶点,使用Venny平台对淡豆豉活性
【机 构】
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杭州医学院检验医学院与生物工程学院
【基金项目】
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中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(编号:ZZ13-035-01); 国家卫生和计划生育委员会科研基金(编号:WKJ-ZJ-1508); 浙江省基础公益研究计划项目(编号:LQY19190001、LGF18C180001、LY18H100005、QQ20H190001);
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目的:淡豆豉广泛应用于治疗流感的方剂中,本研究旨在结合网络药理学和细胞实验初步探讨淡豆豉抗流感病毒作用方式、物质基础和分子生物学基础。方法:通过TCMSP和TCM-ID数据库获取淡豆豉中的活性成分,借助PharmMapper数据库和Swiss target predication数据库获取活性成分靶点信息。在GeneCards和DisGeNET数据库获取流感相关靶点,使用Venny平台对淡豆豉活性成分和流感相关靶点取交集并构建药物-成分-靶点-疾病网络图。利用Cytoscape软件建立可视化蛋白-蛋白相互作用网络(PPI),利用David数据库和R语言进行GO富集分析和KEGG通路与基因功能富集分析及网络可视化。通过细胞实验对重要信号通路进行验证。结果:淡豆豉的主要成分为6"-O-乙酰基苷、大豆黄素、黄豆苷元、染料木素和异黄酮等,在其中共筛选出7个有效成分,涉及靶点868个;流感相关靶点303个,二者交集靶点47个,涉及的关键靶点有:热休克蛋白90 AA1(Hsp90AA1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素-2(IL-2)等。GO分析作用靶点主要富集在蛋白结合、蛋白激酶调节过程。KEGG分析得到关键通路包括:流感病毒信号通路、凋亡信号通路、Toll信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等。细胞实验结果证实,与模型对照组相比较,淡豆豉煎出液8 、1.6 mg/mL组可通过直接作用方式降低24 h后病毒蛋白表达和子代病毒产生量(P<0.05);与模型对照组相比,淡豆豉煎出液8 mg/mL组的热休克蛋白90(Hsp90)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3)及半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶9(caspase 9)转录水平下调(P<0.05),24 h和36 h组的Hsp90、caspase 3及caspase 3剪切体蛋白表达水平和细胞凋亡率均明显降低(P<0.05)。结论:淡豆豉通过与宿主细胞相关靶点相互作用影响病毒的感染、病毒基因组的复制转录翻译过程或调控细胞凋亡发挥抗流感作用。
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