论文部分内容阅读
目的建立结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)检测体系,并用于不同类型临床样本的检测。方法常规提取13株结核分枝杆菌和14株非结核分枝杆菌临床分离株DNA,9例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和4例其他肺部疾病患者痰DNA,12例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和7例健康者血浆DNA。设计合成IS6110和IS1081扩增引物和检测探针,建立dd PCR检测体系。应用该体系检测分枝杆菌、痰和血浆3种DNA样本中靶标拷贝数,进行统计学分析。结果建立了能同时检测IS6110和IS1081的dd PCR体系,该体系检测2个靶标的线性范围分别为0.5~8 733和0.2~2 893拷贝/μl反应体系。该体系具有较好的重复性(r>0.95),以非结核分枝杆菌为对照检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异度均为100%。在痰和血浆DNA样本检测中,2个靶标拷贝数在肺结核组均显著高于对照组。结论结核分枝杆菌特异性核酸的dd PCR体系,可用于肺结核患者临床分离株、痰和血浆样本的微量核酸检测,对提高结核病病原学诊断能力有重要意义。