【摘 要】
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目的采用反转录PCR(RT-PCR)构建人甲胎蛋白(Alpha-Fetoprotein, AFP)全长基因真核表达载体,为下一步应用以AFP蛋白为靶点的基因治疗作准备.方法体外培养人肝癌细胞HepG2,Triz
【机 构】
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第四军医大学西京医院肿瘤中心,北京大学临床肿瘤医院内科,第四军医大学西京医院骨科
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目的采用反转录PCR(RT-PCR)构建人甲胎蛋白(Alpha-Fetoprotein, AFP)全长基因真核表达载体,为下一步应用以AFP蛋白为靶点的基因治疗作准备.方法体外培养人肝癌细胞HepG2,Trizol裂解细胞,提取总mRNA.设计含有特定酶切位点BglⅡ,SalⅠ和真核启动元件Kozak序列的RT-PCT正反向引物,采用RT-PCR法克隆AFP全长cDNA,使用BglⅡ+SalⅠ双酶切载体pEGFP-C3载体和AFP cDNA,将AFP cDNA连接载体pEGFP-C3,构建新的真核表达载体
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