皱褶假丝酵母脂肪酶CRL1的展示表达及其催化合成D-α-生育酚醋酸酯

来源 :2016第五届中国食品安全高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hezhimou
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  维生素E(VE,又称生育酚)是重要的的保健药品,具有抗衰老、提高免疫力的作用.由于VE具有易氧化、表面活性差、不具润湿保湿的功效等缺点,因此目前的研究热点集中于酚羟基的改性上,即生产乙酸酯、琥珀酸酯、阿魏酸酯等VE酯类产品.作为市场上最常见的生育酚衍生物,生育酚醋酸酯可用化学催化剂(三乙胺、HCl/Zncl2)等催化VE与醋酸酐反应得到,但存在副产物多、环境污染严重、选择性差、产物转化率低等缺陷.生物酶法具有反应条件温和、高效、专一、清洁生产等优点,因此开发生物酶法催化合成VE酯具有重要的研究意义和应用价值..皱褶假丝酵母(Candida rugosa)是一种半子囊不产孢子的假丝状单细胞真菌,其脂肪酶(CRL)是目前应用最为广泛的商品化脂肪酶之一,在化工、能源、医疗、食品等领域有广泛的应用.本研究将皱褶假丝酵母脂肪酶1 (CRL1)基因克隆至毕赤酵母展示表达载体pPIC9K-FS实现CRL1在GS115细胞表面的活性展示,甲醇诱导96h后达到6000 U/mg.重组酵母发酵后冻干,在无溶剂体系中催化D-α-生育酚醋酸酯的合成.最适催化条件为:5ml乙酸酐,200mg D-α-生育酚,150mg CRL1,温度80℃,摇床转速200rpm,反应时间2h,D-α-生育酚的转化率接近100%,D-α-生育酚醋酸酯的最大产率约为96%.研究结果表明:活性展示于毕赤酵母表面的CRL1能高效催化D-α-生育酚醋酸酯的合成,具有较好的工业应用潜力.
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