【摘 要】
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目的 食管鳞癌是在中国主要的病理类型,是食管癌中恶性程度高、预后差的一种类型.SLC35E2属于溶质转运体35(SLC35)家族,该家族包含31 个疏水性蛋白,又可分为SLC35A-SLC35G 七个亚家族,该家族成员可通过细胞膜或细胞器膜转运有机或无机分子,此外,该家族的一些成员在某些癌细胞中被鉴定为差异表达蛋白.我们对508 对食管鳞癌样本进行了全基因组测序,发现了SLC35E2 的非编码区存
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目的 食管鳞癌是在中国主要的病理类型,是食管癌中恶性程度高、预后差的一种类型.SLC35E2属于溶质转运体35(SLC35)家族,该家族包含31 个疏水性蛋白,又可分为SLC35A-SLC35G 七个亚家族,该家族成员可通过细胞膜或细胞器膜转运有机或无机分子,此外,该家族的一些成员在某些癌细胞中被鉴定为差异表达蛋白.我们对508 对食管鳞癌样本进行了全基因组测序,发现了SLC35E2 的非编码区存在显著突变.本研究中,我们拟在食管癌细胞中明确SLC35E2 基因的功能,并深入地探讨转录起始区突变对SLC35E2 转录活性的影响.方法 生物学功能方面,RT-PCR 及Western Blot 方法检测食管癌细胞系中SLC35E2 的表达情况,通过Transwell 及CCK8 实验明确过表达及敲降SLC35E2 对食管癌细胞功能的影响.转录活性方面,通过生物信息学软件分析,确定在SLC35E2 的启动子区域及其突变位点附近有转录因子SP1 的结合位点;利用Western Blot 方法确定转录因子SP1 在食管癌细胞系中的表达水平;双荧光素酶报告基因系统及染色质免疫共沉淀方法检测转录因子SP1 是否参与基因SLC35E2 的转录调控并明确其相应的调节方式;另外,过表达或敲降SP1 同时利用RT-PCR 及Western Blot 方法进一步确定转录因子SP1 对SLC35E2 转录及表达水平的调节.结果 通过全基因组测序结果 分析,在SLC35E2 基因的转录起始区存在3 个热点突变位点;Western Blot 方法分析表明SLC35E2 在食管癌细胞系KYSE30、KYSE70、KYSE410 中高表达,而在KYSE180、KYSE510 中表达较低;转录活性方面,我们发现SLC35E2 转录起始区的突变会促进其转录活性.结论 全基因组数据分析SLC35E2 基因转录起始区的热点突变是功能获得性突变,突变型与野生型promoter 比较能增强基因转录活性,在肿瘤组织细胞中发生此类突变能从转录调控水平调控基因表达.
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