大斑病是一种世界性玉米叶部病害,多发生于全球冷凉地区的玉米种植区,常造成严重经济损失。致病菌为大斑刚毛球腔菌[Setosphaeria turcica(Luttrell)Leonard&Suggs],营养类型为半活养寄生的病原真菌,侵染寄主初期为活体营养阶段,待成功侵入之后转入死体营养阶段,这一侵染过程中必然存在着复杂的分子机制。研究玉米大斑菌侵染寄主过程中效应因子的作用机制对于进一步揭示在与寄主互作过程中的病原菌的侵染机制非常重要。本实验室前期根据玉米大斑病菌株Et28A全基因组信息,获得60个大部分功能未知的候选效应蛋白。本试验对60个候选效应因子进行信号肽预测,并对候选效应因子进行内含子分析,发现60个候选效应因子中有24个不含内含子,36个含有一个或多个内含子。为保证效应因子能够在烟草细胞质内稳定地表达并行使功能,依据去掉信号肽后的效应因子cDNA序列设计上游引物,从而保证后续研究中基因表达产物不被分泌到烟草细胞外。分别以玉米大斑病菌Et28A基因组DNA和cDNA为模板,扩增出了24个不含内含子,7个含内含子的效应因子,将所有经高保真酶扩增得到的回收产物经过酶切后连接到相应酶切位点的载体pGR106中,转化大肠杆菌,待长出菌落之后,利用菌落PCR方法验证,验证正确后导入农杆菌。下一步本试验以能够引起烟草过敏性坏死反应的细胞凋亡诱导因子Bax、卵菌中疫霉菌特征分子(PAMP)INF1为阳性对照,以GFP和空白载体为阴性对照,并利用农杆菌介导的病毒表达系统在本氏烟上瞬时表达效应因子,筛选出可直接引起植物反应的效应因子,检测候选效应因子功能。