【摘 要】
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目的 建立基于酶联桥接的悬浮芯片技术对反义寡核苷酸原型以及其代谢物同时进行定量分析.方法 分别合成3端与反义寡核苷酸或其代谢物序列互补的捕获探针，并偶联不同荧光标记地址的微球.通过核酸杂交原理，偶联不同微球的捕获探针分别捕获同一生物样品中反义寡核苷酸以及其代谢物，并通过连接酶的作用，连接上与捕获探针5端互补并带有生物素标记的检测探针，形成不同微球偶联的完整双链分子.在单链特异性Sl核酸酶的作用下，
【机 构】
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军事医学科学院放射与辐射医学研究所药物代谢与药物动力学实验室,北京 100850
【出 处】
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第十届全国药物和化学异物代谢学术会议暨第三届国际ISSX/CSSX联合学术会议
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目的 建立基于酶联桥接的悬浮芯片技术对反义寡核苷酸原型以及其代谢物同时进行定量分析.方法 分别合成3端与反义寡核苷酸或其代谢物序列互补的捕获探针，并偶联不同荧光标记地址的微球.通过核酸杂交原理，偶联不同微球的捕获探针分别捕获同一生物样品中反义寡核苷酸以及其代谢物，并通过连接酶的作用，连接上与捕获探针5端互补并带有生物素标记的检测探针，形成不同微球偶联的完整双链分子.在单链特异性Sl核酸酶的作用下，切除不完整的双链结构，最终利用luminex200悬浮芯片分析系统检测不同微球的荧光信号及检测探针报告信号，从而达到对同一样品中的反义寡核苷酸及其代谢物的同时定量分析.结果 在17μL血浆基质中该方法的定量范围为：100～0.1 nM.在均含有50 nM或0.5 nM反义寡核苷酸原型及其代谢物的同一样品中，该方法检测反义寡核苷酸原型及其代谢物的交叉反应性小于20％，能够特异性地区分反义寡核苷酸及其代谢物.结论 本研究所建立的基于酶联桥接的悬浮芯片技术是一种特异，灵敏和高通量的定量分析方法.能够在同一微量生物样品中同时检测出反义寡核苷酸以及其代谢物，该方法可为寡核酸类药物的药物代谢与动力学研究提供良好的技术基础.
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