假肥大性肌营养不良症是一种严重的神经肌肉疾病,分为 DMD(Duchenne muscular dystrophy)和 BMD(Becker muscular dystrophy),均是由于 dystrophin 基因突变所致。鉴于本病至今没有有效的治疗方法,因此高效、准确的 DMD 致病基因诊断,携带者检测,产前诊断及正确的遗传咨询是预防本病的关键。【目的】:用 MLPA 方法筛查59例 DMD 患者和26 例要求做产前诊断的孕妇羊水 dystrophin 基因突变,对缺失和重复突变的患者及胎儿做出诊断。【方法】:饱和氯化钠法提取基因组 DNA,煮沸法提取羊水细胞 DNA:多重 PCR 检测,设计3组包含 dystrophin 基因外显子突变热点的12对 PCR 引物来筛查 dystrophin 基因的缺失情况:MLPA 检测,80对探针被分成 SALSAP034和 P035两组。所有的反应在标准的盖温为105 ℃的 PCR 仪上进行,ABI3130测序仪电泳分析产物片断;连锁分析,当用 MLPA 方法进行产前筛查没有检测出突变时,选用 dystrophin 基因内及其近旁的7个 STR 位点进行单体型连锁分析。【结果】:应用 MLPA 在59例患者中共检出40例突变(40/59,67.8%)。发现了10例经多重 PCR 检测没有发现的突变,包括3例外显子缺失,1例单碱基缺失和6例外显子重复; 在33例已知外显子缺失病例中,81.8%(27例)的缺失位于中央热区,15.2%(5例)的缺失位于5’端。其中有一个从外显子18到外显子47的大的缺失。如果把6例重复突变计算在内, 内含子44是最常见的断裂点(n=13,33.3%),内含子50和45是第二位(n=11,28.2%)和第三位(n=8,20.5%)。6例重复突变中的4例突变位点位于外显子1至20。本次用 MLPA 筛查的26例高危孕妇中,19例可以直接基因诊断,占73.1%(19/26),其余间接基因诊断。本研究发现了3例新突变,例1为 dystrophin 基因两个位点的重复突变(外显子3-7和外显子44):例2是 dystrophin 基因的点突变(5132del(A)),在 Leiden 数据库中未见相同报道:例3的 dystrophin 基因外显子22缺失,在中国人群中未见报道。【结论】:本实验分析的数据表明用 MLPA 方法在 DMD 患者及未经培养的羊水细胞中进行 dystrophy 基因筛查,直接诊断率可达到67.8～73.7%。我们认为 MLPA 可以作为筛查 DMD/BMD 患者的首选方法,同时检测缺失、重复,可明显提高直接诊断率。