【摘 要】
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相较于公认的自然转化、接合和转导介导的细菌水平基因转移途径,本实验室研究的枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组过程已通过相关实验证实,其方式有别于以上传统的细菌水平基因
【机 构】
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武汉大学生命科学学院,武汉430072
【出 处】
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中国微生物学会第十六届全国微生物学教学和科研及成果产业化研讨会
论文部分内容阅读
相较于公认的自然转化、接合和转导介导的细菌水平基因转移途径,本实验室研究的枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组过程已通过相关实验证实,其方式有别于以上传统的细菌水平基因转移途径,并且发现此过程中供体染色体DNA是以长片段形式的转移过程使最大化地提高重组频率.为了进一步证明此过程的发生,我们构建了供体菌Bacillus.subtilis 92082-SO (trpC+,△comK,spoIVA∷lacO),在相近的lysA和trpC基因间的spoIVA基因插入了约120个的Lac操纵基因拷贝(序列长度为近5 Kb),同时构建了Bacillus.subtilis 92082-LTA [lysA-,trpC-,amyE∷(Ppen-lacI△11-gfpmut2)]/pBE2作为受体菌, 其在amyE基因位置插入了Ppen-lac1△11-gfpmut2融合表达lacI-GFP蛋白,以此组成了lacO/LacI-GFP系统.当受体菌的赖氨酸和色氨酸缺陷型发生回补时,供体基因组上lacO序列也将被带入受体菌中,此时受体菌表达的lacI-GFP融合蛋白会结合在多拷贝的lacO序列上,通过荧光共聚焦显微镜可以观察到荧光点聚集,以此可视化了枯草芽胞杆菌细胞间遗传重组过程中染色体DNA的长片段转移过程.此外,通过此系统的重要时间节点的观测可以更有助于我们深入研究此过程的发生机制,以期许为水平基因转移方式有更深入的理解和补充.
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