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研究背景腹主动脉瘤（Abdominal Aortic Aneurysm,AAA）是临床上一种常见的动脉退行性疾病,其表现为腹主动脉的永久性局部瘤样扩张。腹主动脉瘤随着瘤体的增大,破裂风险逐渐增高,一旦发生破裂,死亡率可高达90%。目前,对于瘤体最大直径≥5.5cm的腹主动脉瘤,常采取外科手术治疗。对于瘤体直径＜5.5 cm的小腹主动脉瘤,因手术治疗对长期存活率无明显改善,目前主要采取随访观察。但腹主动脉瘤具有进行性扩张的自然病程,随访观察中有部分病人发生破裂死亡,这种策略显然是不完善。肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）是体内维持血压、水和电解质平衡及心血管稳态的重要调控系统,广泛表达于心脏、血管、肾脏等多种组织器官。既往研究证实RAS系统在腹主动脉瘤的发生、发展过程中发挥重要作用。近年来,各项研究表明RAS系统的新成员Ang-（1-7）能显著抑制腹主动脉瘤瘤壁的炎症反应进而抑制AAA的进展。近年来研究发现RAS家族中新的重要成员alamandine,其结构与Ang-（1-7）相似,alamandine与其受体 MrgD 构成 alamandine/MrgD 轴。目前,Ang-（1-7）/Mas 及 alamandine/MrgD等代谢轴被称为RAS的第2代谢轴。近年来许多研究发现,alamandine/MrgD轴在许多疾病的病理生理过程中表现出与Ang-（1-7）/Mas轴相似的保护作用。Alamandine在动脉硬化模型中能够显著抑制炎症细胞的聚集,其可通过MrgD受体拮抗Ang Ⅱ导致的心肌肥厚。同时,也有研究表明alamandine能通过抑制炎症反应而减弱脓毒症对心脏的损害。但alamandine是否作为抗炎因子对AAA起到治疗作用尚不清楚。慢性炎症是腹主动脉瘤形成、进展及破裂过程中的重要病理特征。目前国内外较多学者将重点放在经典RAS途径对腹主动脉瘤的影响,鲜有人关注RAS系统第2代谢轴在腹主动脉瘤中的作用。本论文中我们通过弹力蛋白酶腔内灌注构建小鼠腹主动脉瘤模型,并应用该模型研究alamandine/MrgD轴是否可抑制瘤壁的炎症反应,进而对AAA起治疗作用,从而为临床治疗腹主动脉瘤提供新的思路。研究内容1.应用弹力蛋白酶腔内灌注构建小鼠腹主动脉瘤模型,并通过B超对小鼠腹主动脉瘤模型进行评估,建立瘤体增长曲线。2.明确alamandine对小鼠腹主动脉瘤的治疗作用3.探索MrgD受体在alamandine对小鼠腹主动脉瘤治疗过程中的作用。研究方法:1.猪胰蛋白酶灌注小鼠腹主动脉构建AAA小鼠动物模型:将C57BL/6雄性小鼠分为假手术组和腹主动脉瘤模型组。分离左肾静脉水平至腹主动脉分叉处的一段腹主动脉并结扎该段腹主动脉发出的腰动脉,近心端绕线打活结阻断血流,以21G针穿刺腹主动脉近分叉处前壁,将PPE-10管沿穿刺孔插入腹主动脉腔内,送至近心段,远心端丝线打活结固定PPE-10管,腹主动脉腔内注入弹力蛋白酶溶液。术后通过给予B超检测,HE染色及EVG染色判定造模是否成功。2.探究alamandine及MrgD拮抗剂D-Pro7-Ang-（1-7）对小鼠腹主动脉瘤的影响:在本研究中,选用D-Pro7-Ang-（1-7）作为MrgD受体的拮抗剂。将AAA模型随机分为 3 组（对照组、almandine 组、almandine+D-Pro7-Ang-（1-7）组）。对照组皮下给药 PBS,AAA+almandine 组皮下给药 alamandine（24μg/kg/h）、AAA+D-Pro7-Ang-（1-7）组皮下给药alamandine（24μg/kg/h）、D-Pro7-Ang-（1-7）（24μg/kg/h）。术前及术后3、7、14天应用B超测量各组腹主动脉以观察瘤径变化。3.应用HE染色、EVG染色、免疫组化检测各组小鼠动脉瘤瘤壁变化及瘤壁炎症反应情况。研究结果:1.造模情况:于造模后3、7、14天后行B超检测,显示腹主动脉瘤动物模型的瘤体直径随时间逐渐增大,术后14天瘤体最大直径超过术前直径的50%,从瘤体直径方面表明小鼠腹主动脉瘤模型成功建立。HE及EVG染色可见瘤壁组织结构紊乱,弹力纤维大量被降解破坏,瘤壁中层平滑肌细胞排列紊乱,数量明显减少,各层均可见炎性细胞浸润,进一步表明AAA模型构建成功。2.Alamandine治疗组较对照组小鼠动脉瘤瘤体最大直径明显缩小;EVG染色显示瘤壁弹力纤维降解较对照组明显减轻;免疫组化显示:alamandine组瘤壁CD68+巨噬细胞、CD80+M1型巨噬细胞、CD8+T细胞的浸润程度以及CD31+新生血管生成均较对照组明显减少,同时,alamandine瘤壁组织中MMP-9的表达水平以及平滑肌细胞的降解均较对照组明显减少,而CD206+M2型巨噬细胞浸润较对照组增多。3.应用 MrgD 拮抗剂 D-Pro7-Ang-（1-7）后,EVG 染色显示 almandine+D-Pro7-Ang-（1-7）组瘤壁弹力纤维降解较almandine组明显加重;免疫组化显示:almandine+D-Pro7-Ang-（1-7）组瘤壁 CD68+巨噬细胞、CD80+M1 型巨噬细胞、CD8+T细胞浸润程度以及CD31+新生血管生成均较alamandine组明显增加;almandine+D-Pro7-Ang-（1-7）组瘤壁MMP-9的表达以及平滑肌细胞降解较alamandine组明显增加,而CD206+M2型巨噬细胞浸润较alamandine组减少。结论1.应用弹力蛋白酶腔内灌注模型成功构建小鼠腹主动脉瘤模型,alamandine限制了实验性腹主动脉瘤的增长。2.Alamandine可以通过抑制小鼠腹主动脉瘤瘤壁炎症反应、弹力蛋白以及血管平滑肌细胞的降解、新生血管形成,从而抑制小鼠腹主动脉瘤的发生发展。3.MrgD受体拮抗剂D-Pro7-Ang-（1-7）可阻断alamandine的治疗作用。4.Alamandine/MrgD轴可能为治疗腹主动脉瘤提供了一个新的思路。