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目的:周围神经损伤是临床常见疾病,但损伤后的神经修复和再生过程异常繁杂,是临床治疗的难题。随着显微外科技术的进步,受损神经的连续性已经能够得到较好地重塑,但神经功能的恢复却依然不尽人意,因而许多研究者开始从神经修复和再生的内在分子机制寻找解决途径。周围神经在解剖和功能上存在特殊性,外周神经损伤后,神经纤维变性,髓鞘腔崩解断裂,尼氏体消失,神经膜管萎缩变窄,并脱离胞体的轴突远端,发生退行性改变及瓦勒变性。周围神经损伤后,由于神经再生距离较长、再生神经与周围组织粘连、神经再生速度缓慢、运动终板退化变性及神经肌肉萎缩等均制约着损伤神经的再生与修复。因此,损伤神经的再生与功能恢复是涉及多个机制的复杂过程,但主要依赖于轴突的成功再生及其生长的微环境,而其所处的微环境,包括神经再生通道建立、神经营养因子调节、炎性反应、激素调节、信号通路调控及酶的调节等多种因素都会影响轴突的再生及定向。随着细胞生物学与分子生物学研究的不断深入,临床已采用包括药物治疗、自体神经移植、异体神经移植、神经导管、神经支架材料及基因治疗等多种治疗方法和手段治疗周围神经损伤,然而,即使患者经过较为科学的治疗,仍会留下程度不一的后遗症。因此,深入研究神经损伤后的病理机制以及寻求新的治疗靶点仍是临床亟待解决的问题。微小RNA是在细胞中广泛存在的一类长约19～25个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,通过与下游靶基因的3′端非翻译区结合调控靶基因的降解和翻译,并通过抑制靶基因的转录翻译等行为,调控细胞的生物学功能。研究发现,mi RNA不仅在神经发育中起重要作用,还参与氧化应激、炎症和神经细胞凋亡等神经受损后的继发性损伤。mi R-181a-5p与多种肿瘤、免疫系统疾病、骨骼肌肉系统疾病和心血管系统疾病的发生有关,且在多种神经系统疾病的发生发展中具有重要的调控作用。已有实验证实mi R-181a-5p参与神经系统疾病的发生、诊断及预后。然而,关于mi R-181a-5p在周围神经损伤中的作用研究甚少。本研究通过构建坐骨神经损伤大鼠模型并原代培养施旺细胞,在体内外水平检测mi R-181a-5p对坐骨神经损伤及神经细胞增殖、迁移、凋亡和再生的影响,探讨其在周围神经损伤中的作用,为神经损伤的治疗提供新思路。研究方法:1、探究mi R-181a-5p对坐骨神经损伤后神经细胞再生及凋亡的影响:建立坐骨神经损伤大鼠模型,通过HE染色检测坐骨神经病理学变化,通过TUNEL检测坐骨神经细胞凋亡,通过FISH和q RT-PCR检测坐骨神经mi R-181a-5p表达;鞘内注射antagomi R-181a-5p,通过q RT-PCR检测坐骨神经mi R-181a-5p表达,通过HE染色检测坐骨神经病理学变化,通过TUNEL检测坐骨神经细胞凋亡;原代培养施旺细胞,转染mi R-181a-5p模拟物及抑制剂,通过q RT-PCR验证转染效率,通过CCK-8检测细胞增殖,通过Transwell检测细胞迁移,通过流式细胞术检测细胞凋亡,通过Western blot检测神经再生相关蛋白表达。2、探究mi R-181a-5p是否通过靶向SIRT1影响坐骨神经损伤后神经细胞再生及凋亡:生物信息学数据库预测mi R-181a-5p靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证;鞘内注射antagomi R-181a-5p并给于SIRT1抑制剂,通过q RT-PCR检测SIRT1 m RNA表达,通过Western blot检测SIRT1蛋白表达,通过HE染色检测坐骨神经病理学变化,通过TUNEL检测坐骨神经细胞凋亡;原代培养施旺细胞,转染mi R-181a-5p模拟物和过表达SIRT1或转染mi R-181a-5p抑制剂和沉默SIRT1,通过q RT-PCR检测SIRT1 m RNA表达,通过Western blot检测SIRT1蛋白表达,通过CCK-8检测细胞增殖,通过Transwell检测细胞迁移,通过流式细胞术检测细胞凋亡,通过Western blot检测神经再生相关蛋白表达。3、探究mi R-181a-5p是否通过靶向SIRT1介导FOXO1/NF-κB信号通路影响坐骨神经损伤后神经细胞再生及凋亡:鞘内注射antagomi R-181a-5p并给予SIRT1抑制剂后沉默FOXO1,通过Western blot检测FOXO1/NF-κB信号通路蛋白表达,通过HE染色检测坐骨神经病理学变化,通过TUNEL检测坐骨神经细胞凋亡;原代培养施旺细胞,转染mi R-181a-5p模拟物、过表达SIRT1和过表达FOXO1或转染mi R-181a-5p抑制剂、沉默SIRT1和沉默FOXO1,通过Western blot检测FOXO1/NF-κB信号通路蛋白表达,通过CCK-8检测细胞增殖,通过Transwell检测细胞迁移,通过流式细胞术检测细胞凋亡,通过Western blot检测神经再生相关蛋白表达。结果:1、成功建立大鼠坐骨神经损伤模型,鞘内注射antagomi R-181a-5p降低坐骨神经损伤大鼠坐骨神经mi R-181a-5p表达,改善大鼠坐骨神经损伤,降低坐骨神经细胞凋亡水平;成功培养施旺细胞,转染mi R-181a-5p模拟物增加细胞mi R-181a-5p表达,抑制细胞增殖、迁移和再生,促进细胞凋亡。2、mi R-181a-5p靶向结合SIRT1,鞘内注射antagomi R-181a-5p增加坐骨神经损伤大鼠坐骨神经SIRT1表达,给予SIRT1抑制剂逆转了antagomi R-181a-5p对大鼠坐骨神经损伤的改善作用和细胞凋亡的抑制作用;转染mi R-181a-5p模拟物降低施旺细胞SIRT1表达,过表达SIRT1逆转了mi R-181a-5p模拟物对施旺细胞增殖、迁移和再生的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,转染mi R-181a-5p抑制剂反之。3、沉默FOXO1逆转了给予antagomi R-181a-5p和SIRT1抑制剂对FOXO1信号通路的激活,且改善坐骨神经损伤,降低坐骨神经细胞凋亡水平;过表达FOXO1逆转了转染mi R-181a-5p模拟物和过表达SIRT1对施旺细胞增殖、迁移和再生的促进作用及对细胞凋亡的抑制作用。结论:Mi R-181a-5p通过靶向抑制SIRT1激活FOXO1/NF-κB信号通路抑制坐骨神经细胞再生,增加神经细胞凋亡