【摘 要】
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目的:研究发现,酸性神经酰胺酶（Acid ceramidase,ASAH1,AC）是神经酰胺酶（Ceramidase,CDase）的一种,能水解神经酰胺（Ceramide,Cer）。AC在头颈癌、黑色素瘤、乳腺癌等肿瘤中呈高表达,并且与肿瘤的发生发展密切相关,可能是一种潜在的抗肿瘤治疗靶点;在多靶点药物开发中,AC可能是具有前景的靶蛋白。但目前在肝细胞癌中AC的研究报道尚少,本课题以肝癌为对象进行
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目的:研究发现,酸性神经酰胺酶（Acid ceramidase,ASAH1,AC）是神经酰胺酶（Ceramidase,CDase）的一种,能水解神经酰胺（Ceramide,Cer）。AC在头颈癌、黑色素瘤、乳腺癌等肿瘤中呈高表达,并且与肿瘤的发生发展密切相关,可能是一种潜在的抗肿瘤治疗靶点;在多靶点药物开发中,AC可能是具有前景的靶蛋白。但目前在肝细胞癌中AC的研究报道尚少,本课题以肝癌为对象进行深入研究,以期探讨ASAH1对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法:通过免疫组织化学检测28例肝细胞癌及其癌旁组织中AC的表达情况。用Western Blot及荧光定量PCR检测AC在肝癌细胞Huh7、SK-HEP-1、Hep G2中的表达情况,并用表达较低的SK-HEP-1细胞和表达较高的Huh7细胞来构建过表达及敲降的稳转细胞株。采用侵袭、迁移、划痕实验、CCK-8以及质谱检测等探索AC对肝癌细胞迁移、侵袭及增殖的影响。通过自噬诱导剂Rapamycin处理野生型肝癌细胞SK-HEP-1,自噬抑制剂3-MA、酸性神经酰胺酶抑制剂NOE处理过表达AC的肝癌细胞SK-HEP-1,再用Western Blot检测上述处理后的细胞AC、LC3 B、P62、GAPDH、β-actin等的表达,通过迁移、侵袭以及CCK-8实验检测自噬抑制剂3-MA处理对细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响,从而探讨AC对肝癌细胞生物学行为的影响及机制。结果:AC在肝癌组织中的表达高于癌旁组织。细胞功能实验表明:AC促进肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭。自噬抑制剂3-MA抑制AC过表达的肝癌细胞SK-HEP-1的侵袭、迁移、增殖,同时下调AC及自噬标记蛋白LC3B的表达,上调P62的表达;自噬诱导剂Rapamycin上调AC及自噬标记蛋白LC3 B的表达,下调P62的表达;酸性神经酰胺酶抑制剂NOE可激活肝癌细胞的自我保护机制,抑制AC表达的同时,上调自噬标记蛋白LC3 B的表达,下调P62的表达。结论:AC通过细胞自噬途径促进了肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖;酸性神经酰胺酶抑制剂NOE不能抑制肝细胞癌的自噬水平,但可能诱导细胞的自我保护机制,促进了肝细胞癌的自噬。
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