【摘 要】
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目的:通过探讨ER-α30对ER阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,探索ER-α30促进ER阴性乳腺癌侵袭转移的分子机制,为今后ER-α30在ER阴性乳腺癌的诊断、治疗及预后评估中的作用提供更多可能的解释。方法:1.收集43例ER阴性乳腺癌组织与癌旁组织,应用IHC方法明确ER-α30在乳腺癌组织及其癌旁组织中的表达情况。2.通过慢病毒和脂质体构建ER-α30的过表达和沉默载体,上调和下调ER-
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目的:通过探讨ER-α30对ER阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,探索ER-α30促进ER阴性乳腺癌侵袭转移的分子机制,为今后ER-α30在ER阴性乳腺癌的诊断、治疗及预后评估中的作用提供更多可能的解释。方法:1.收集43例ER阴性乳腺癌组织与癌旁组织,应用IHC方法明确ER-α30在乳腺癌组织及其癌旁组织中的表达情况。2.通过慢病毒和脂质体构建ER-α30的过表达和沉默载体,上调和下调ER-α30的表达至两种ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT-549中并使用Western blot实验检测载体是否构建成功。3.ER-α30过表达和沉默载体成功后采用CCK-8实验、细胞划痕实验和transwell侵袭实验检测ER-α30对ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT-549增殖、迁移、侵袭能力的影响。4.通过Western blot实验检测ER-α30对MMP、VEGF-D、N-cadherin、Vimentin和E-cadherin蛋白表达的影响。5.通过转录测序分析过表达ER-α30对ER阴性乳腺癌细胞转录的影响。6.筛选出6个差异表达明显的lnc RNA并通过RT-PCR验证ER-α30对lnc RNA表达水平的影响。7.通过RIP实验验证在ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT-549中ER-α30与lnc RNA ZEB1-223的靶向关系。结果:1.ER-α30在ER阴性乳腺癌癌的免疫组化试验结果显示:ER-α30阳性表达主要分布于细胞核中,乳腺癌组织中ER-α30阳性表达率为46.5%（20/43）明显高于其癌旁组织[20.9%（9/43）],差异有统计学意义（P＜0.01）。2.MDA-MB-231和BT-549癌细胞中ER-α30表达水平升高后,ER-α30明显促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭;相反,乳腺癌细胞中ER-α30水平下降后,ER-α30明显抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移。3.在MDA-MB-231和BT-549乳腺癌细胞中,ER-α30过表达组中MMP9、VEGF-D、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平明显提升,E-cadherin蛋白表达水平显著降低;相反,下调ER-α30后MMP9、VEGF-D、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著提升。4.通过转录组测序得到差异表达基因,GO分析结果显示差异表达基因主要在在细胞外基质（extracellular matrix）、细胞粘附（cell adhesion）、生长因子活性（growth factor activity）等富集;KEGG通路分析结果显示,差异表达基因主要富集在细胞外基质受体的相互作用（Ecm-receptor interaction）、肥厚性心肌病（Hypertrophic cardiomyopathy,HCM）、产生Ig A的肠道免疫网络（Intestinal immune network）。5.RT-PCR检测ER阴性乳腺癌细胞中上调和下调ER-α30对lnc RNA表达情况的影响,结果显示ER-α30过表达组中CHCHD6-207、ENTPD3-AS1-203的表达水平明显升高,而SPIDR-225、RERE-213、ZEB1-223、EXOC4-219的表达水平明显降低。相反,敲低ER-α30后CHCHD6-207、ENTPD3-AS1-203的表达水平明显降低,而SPIDR-225、RERE-213、ZEB1-223、EXOC4-219表达水平明显升高。6.RIP实验结果显示在MDA-MB-231和BT-549细胞中,ER-α30与ZEB1-223之间存在靶向关系。结论:ER-α30可促进ER阴性乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,而ER-α30促进ER阴性乳腺癌发生侵袭转移的机制可能是ER-α30通过调控ZEB1-223的水平来参与EMT进程的发生。
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