目的:探讨G蛋白偶联受体激酶4（G protein-coupled receptor kinases 4,GRK4）在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法:1.构建p EGFP-N1-GRK4α、β、γ、δ表达质粒,转染HEK-293T细胞,流式细胞术分选为GRK4（+）和GRK4（-）细胞群,MTT法检测GRK4各亚型对细胞增殖的影响以及q RT-PCR实验检测分选后不同GRK4亚型细胞中78个细胞增殖调控相关基因谱的差异表达情况。2.GEPIA和KaplanMeier数据库检索GRK4在人乳腺癌和癌旁组织中的表达情况及预后关系;收集乳腺癌病人组织样本,蛋白免疫印迹法和免疫组织化学技术检测GRK4在人乳腺癌和癌旁组织的表达和分布;提取组织中总RNA,逆转录为c DNA后PCR扩增得到DNA,测序。3.检测人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB231中GRK4的表达水平,分别对GRK4高表达的MCF-7细胞和GRK4低表达的MDA-MB 231细胞进行GRK4基因沉默和慢病毒介导的GRK4过表达实验,MTT和克隆形成实验检测GRK4对细胞增殖的影响,划痕实验检测GRK4对细胞迁移的影响。4.去甲基化药物5-aza作用于MDA-MB 231细胞72h观察GRK4表达量的变化,MSP实验观察MDA-MB 231细胞中GRK4启动子区甲基化状态。结果:1.成功构建p EGFP-N1-GRK4α、β、γ、δ质粒,转染HEK-293T细胞,24h后观察到荧光信号,流式细胞术分选为HEK-293T-GRK4（+）和HEK-293T-GRK4（-）细胞。GRK4α、β、γ、δ过表达均能抑制HEK-293T细胞的增殖,q RT-PCR结果显示,与阴性对照组相比,GRK4α（+）细胞中CITED2、COL1A1、COL3A1ING1、MAPK14、MORC3、PIK3CA、PTEN、SPARC、TGFB1、TP63 11个细胞生长相关基因的m RNA水平显著升高（P＜0.05）,Cyclin A2、EGR1、MYC 3个基因的m RNA水平显著降低（P＜0.05）;GRK4β（+）细胞中CD44、CITED2、COL1A1、PLAU 4个细胞生长相关基因的m RNA水平显著升高（P＜0.05）,Cyclin E1、CDK2、CDK4、CDK6、p21、EGR1、ETS2、HPRT1、MAP2K1、MAP2K3、MYC、TWIST1 12个基因的m RNA水平显著降低（P＜0.05）;GRK4γ（+）细胞中ATM、CD44、p15、CITED2、COL1A1、GADD45A、IGFBP3、IGFBP7、SPARC 9个细胞生长相关基因的m RNA水平显著升高（P＜0.05）,p57、EGR1、ETS2、PCNA这4个基因的m RNA水平显著降低（P＜0.05）;GRK4δ（+）细胞中CALR、p19、IGFBP3、MDM2、MORC3、SPARC、TBX2、TERF2、THBS1这9个细胞生长相关基因的m RNA水平显著升高（P＜0.05）,Cyclin B1、CD44、p21、p57、CHEK1、COL1A1、CREG1、EGR1、GSK3B、HPRT1、MAP2K6、NBN、TP53BP1、TWIST1等14个基因的m RNA水平显著降低（P＜0.05）。2.数据库检索分析和蛋白免疫印迹法结果表明GRK4在乳腺癌组织中表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）。免疫组化实验显示GRK4主要表达于胞浆（膜）。对乳腺癌和癌旁组织PCR扩增和测序的结果均显示组织中表达为GRK4δ亚型。3.MTT和克隆形成实验显示在MCF-7细胞中沉默GRK4抑制细胞的增殖（P＜0.05）,在MDA-MB 231细胞中过表达GRK4抑制细胞的增殖（P＜0.05）,划痕实验显示过表达GRK4抑制细胞的迁移（P＜0.05）。4.GRK4在MDA-MB 231细胞中的表达水平随5-aza作用浓度的增加而增高,MSP实验显示用甲基化引物进行扩增均有条带,但非甲基化引物则没有条带。结论:1.四种亚型的GRK4在体外均具有抑制HEK293T细胞增殖的生物学作用;2.GRK4在人乳腺癌组织中显著低表达,其在乳腺癌组织中表达GRK4δ亚型;3.GRK4促进Luminal A型乳腺癌细胞MCF-7的增殖,而抑制三阴型MDA-MB 231细胞的增殖。4.在乳腺癌MDA-MB 231细胞中GRK4基因启动子区高甲基化导致其低表达。本研究为揭示GRK4抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的机制、进一步开展GRK4抗肿瘤研究提供了有价值的信息。