藻类抗氧化活性物质提高精子活性的机制研究

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全球范围内大约有15%的夫妇存在着不孕不育的问题,其中一半病例是由于男性因素造成的。而由活性氧(Reactive oxygen species,ROS)造成精子功能障碍最终导致的少弱精子症则是引起男性不育症的一个重要原因,占男性不育症患者的25%~40%。目前普遍的治疗方案是补充抗氧化剂,但因少弱精子症是由多种因素诱发的,不是一种相对独立的疾病,且该病的发病机制还未被完全阐明,因此目前的西药治疗和中药治疗都存在着一定局限性,主要体现在治疗的临床疗效不理想,并未显著改变男性不育症的现状。虽然近年来,人类辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology,ART)作为一种新的治疗方法,使得少弱精子症患者的受孕率得到提高,但患者的精子质量并未从根本上得到改善。寻找更为有效的抗氧化剂是解决提高精子质量这个根本问题的重要途径。藻类提取物中的多糖、蛋白质、虾青素、β-胡萝卜素、酚类化合物等多种活性物质已被证明具有抗氧化活性,且具有高效、无毒、质优、价廉等优势。研究利用藻类抗氧化活性物质的潜在作用治疗男性不育症,不仅有助于阐明藻类抗氧化活性物质提高精子活性的机制,而且具有广阔的应用前景。本文选取具有潜在抗氧化活性的常见藻类的藻粉和多糖、色素提取物,包括钝顶节旋藻粉、节旋藻多糖10%提取物、节旋藻多糖30%提取物、海带多糖10%提取物、海带多糖30%提取物A、海带多糖30%提取物B、紫菜多糖30%提取物、5%岩藻黄素、5%虾青素、蛋白核小球藻粉共10种不同的藻类提取物,通过测定这10种藻类提取物对羟自由基、超氧阴离子、DPPH自由基、ABTS自由基的清除能力,比较其抗氧化活性,并结合10种藻类提取物的物理化学性质,对其体外抗氧化活性机理进行分析。同时,通过动物实验对中药联合藻类提取物在弱精子症模型大鼠中的治疗作用进行对比实验研究,从而探讨藻类抗氧化活性物质提高精子活性的机制。主要结果和结论如下:1.体外抗氧化活性实验结果表明,对羟自由基来说,钝顶节旋藻粉的清除能力最强,其半抑制浓度(IC50)为0.01±0.01 mg/mL;对超氧阴离子来说,5%岩藻黄素的清除能力最强,其1C50值为35.03±2.89 mg/mL;对DPPH自由基来说,5%虾青素的清除能力最强,其IC50值为4.55±0.14 mg/mL;对ABTS自由基来说,30%海带多糖B的清除能力最强,其 IC50 值为 4.67±0.13 mg/mL。2.结合10种藻类提取物的物化性质对其抗氧化活性进行分析,结果显示·OH清除率与糖含量呈显著负相关(Pearson,P<0.05);ABTS+·清除率与糖含量呈显著正相关(Pearson,P<0.05),即糖成分的存在对它们的抗氧化特性起到一定的作用。3.通过不同剂量奥硝?(ORN)造弱精子症大鼠模型并进行藻类联合中药的动物实验,结果表明,使用600 mg/kg剂量的ORN来造弱精子症大鼠模型更为合适。在所有的治疗组中中药联合海带多糖对弱精子症模型大鼠的治疗效果更为显著。4.低中药高海带多糖组对弱精子症模型大鼠具有显著的治疗效果,相比较于模型组的精子浓度(22.7±4.32 ×106/mL)、精子活动率(28.75±9.01%)、MDA 水平(18.10 ±6.08 nmol/mg prot)和SOD活性(126.42±5.67 U/mg prot),治疗后的精子浓度(43.8±8.4× 106/mL)和精子活动率(58.08±11.88%)显著提高(分别提高了93.0%和102.0%),附睾组织MDA水平(7.49±3.59 nmol/mg prot)显著降低(降低了 58.6%),SOD活性(136.32±14.80 U/mg prot)有所提高。5.将藻类提取物与菟丝二仙汤联用对600 mg/kg ORN所致弱精子模型大鼠具有潜在治疗效果,对精子具有保护作用,提高了模型大鼠的精子浓度和精子活动率,也提高了附睾组织的抗氧化水平,降低了附睾组织受到的氧化应激损伤。
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