【摘 要】
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环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一类呈封闭环状结构的RNA,富含micro RNA（miRNA）结合位点,在细胞中可充当miRNA海绵（miRNA sponge）,进而环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一类呈封闭环状结构的RNA,富含micro RNA（miRNA）结合位点,在细胞中可充当miRNA海绵,进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用。大量
【基金项目】
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国家自然科学基金（31872336）； 山西省科技成果转化引导专项项目（201804D131040）； 三晋学者支持计划专项经费资助（2016,2017）；
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环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一类呈封闭环状结构的RNA,富含micro RNA（miRNA）结合位点,在细胞中可充当miRNA海绵（miRNA sponge）,进而环状RNA（circular RNA,circ RNA）是一类呈封闭环状结构的RNA,富含micro RNA（miRNA）结合位点,在细胞中可充当miRNA海绵,进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用。大量研究证明circ RNA在细胞分化的生物学过程中起重要作用,研究circ RNA对猪肌内前体脂肪细胞和猪骨骼肌卫星细胞的作用,可完善circ RNA调控肉质性状的分子网络机制。通过分析全转录测序数据发现一条环状RNA,即circIGF1R,本研究通过过表达及干扰circIGF1R探究其对猪肌内前体脂肪细胞及骨骼肌卫星细胞分化的影响;通过双荧光素酶报告基因试验和RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）探究circIGF1R通过miR-16调控细胞成脂/成肌分化的机制,试验结果如下:1、通过正反向引物PCR、Sanger测序、RNase R酶消化试验、放线菌素D试验和q RT-PCR检测发现circIGF1R是由IGF1R第2外显子形成,使用CPTA、ORF finder、IRESite及SRAMP预测了circIGF1R具有翻译功能。经全转录组测序结果分析,确定circIGF1R为miR-16的海绵分子,进一步采用miRDB、Target Scan和miRWalk在线软件预测了miR-16共有360个靶基因,并富集到52条GO条目和32条KEGG通路,通过筛选,选定FASN为进一步研究的靶基因。2、在猪肌内前体脂肪细胞中过表达circIGF1R后,q RT-PCR结果显示C/EBPα、C/EBPβ、FABP4和PPARγ的表达均极显著升高（P＜0.01）,油红O染色发现脂滴数明显增多,干扰circIGF1R后呈现相反的结果,同时在C3H10T1/2细胞中过表达或干扰circIGF1R得到相同的结果,表明circIGF1R可促进细胞成脂分化。在猪骨骼肌卫星细胞中过表达circIGF1R后,q RT-PCR结果显示Myo D、Myo G、My HC、Myf5的表达均极显著升高（P＜0.01）,免疫荧光染色发现肌管明显增多,干扰circIGF1R后呈现相反的结果,在C2C12细胞中过表达或干扰circIGF1R得到相同的结果,表明circIGF1R可促进细胞成肌分化。以上结果表明circIGF1R可促进猪肌内前体脂肪细胞和C3H10T1/2细胞成脂分化以及促进猪骨骼肌卫星细胞核C2C12细胞成肌分化,其在猪和小鼠中发挥的功能一致。3、通过双荧光素酶报告基因试验和RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）试验结果表明,circIGF1R/miR-16/FASN之间存在结合作用;过表达miR-16后可抑制C3H10T1/2细胞成脂分化以及抑制C2C12细胞成肌分化,抑制miR-16后呈现相反结果,表明miR-16在成脂分化和成肌分化中与circIGF1R呈现相反的作用。综上所述,circIGF1R可能通过miR-16促进猪前体脂肪细胞成脂分化及猪骨骼肌卫星细胞成肌分化。
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