论文部分内容阅读
研究目的:检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、牙龈卟啉单胞菌(ATCC 33277)以及热灭活牙龈卟啉单胞菌(Heat-killed P.gingivalis,HP.gingivalis)诱导的炎症环境中,人牙龈成纤维细胞(h GFs)NLRP3炎症小体和促炎因子IL-1β的表达。进一步探索炎症状态下,外源性三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)对h GFs NLRP3炎症小体的活化以及下游炎症因子IL-1β分泌水平的影响。材料与方法:采用组织块法培养原代h GFs,选取生长状态良好的P4-P5细胞进行实验。分别使用1ug/ml的P.gingivalis LPS、100 MOI P.gingivalis、100MOI HP.gingivalis体外刺激h GFs,加入5mmol/L外源性ATP共刺激,应用real-time PCR技术检测NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1βm RNA的水平;western blot技术检测胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的表达;ELISA技术检测胞外IL-1β的分泌。结果:与单纯细胞对照组相比较,P.gingivalis刺激下调NLRP3、ASC基因表达,上调IL-1βm RNA表达,降低胞内NLRP3、IL-1β蛋白水平。HP.gingivalis或者P.gingivalis LPS刺激均可诱导NLRP3、IL-1β、ASC m RNA和胞内NLRP3、IL-1β蛋白表达,三者单独刺激均对Caspase-1基因水平及IL-1β分泌无明显影响;ATP/P.gingivalis LPS、ATP/P.gingivalis、ATP/HP.gingivalis共刺激均明显增加NLRP3、ASC、Caspase-1和IL-1β基因水平及胞内NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达,促进上清液中IL-1β的分泌水平升高。结论:P.gingivalis LPS、P.gingivalis或者HP.gingivalis可作为第一信号调控NLRP3炎症小体基因及胞内NLRP3、IL-1β蛋白表达,在第二信号外源性ATP作用下活化炎症状态的人牙龈成纤维细胞NLRP3炎症小体,介导促炎因子IL-1β的成熟与分泌。