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背景及目的:中国是食管癌大国,食管癌病理类型多数为鳞状细胞癌,70%-80%患者诊断时已为局部晚期,无法手术或无法仅靠手术治愈。因此根治性放化疗是局部晚期无法手术食管癌患者的主要治疗手段。但往往因为高龄、体质差、进食困难、或前期不规范治疗等原因,导致就诊时无法选择同步放化疗,而只能选择单纯放疗。联合高效低毒药物增敏放疗是临床上目前对于无法手术且不耐受同步放化疗的局部晚期食管鳞癌患者的主要解决方案。近年来,由于发现了分子靶向药物的辐射增敏效应,食管癌的靶点也较多,更多提倡靶向药物联合放疗提高肿瘤对射线的敏感性,但联合放疗的最佳时间窗研究较少。多靶点抗肿瘤药物安罗替尼（Anlotinib）是国产的小分子酪氨酸激酶抑制剂（TKI）,在肿瘤细胞生长和肿瘤血管生成方面具有双重抑制作用,而且在2019年CSCO食管癌诊疗指南和《中国食管癌放射治疗指南》（2019版）中,对于不可手术切除的局部晚期或晚期食管鳞癌,安罗替尼也作为II级推荐。本实验拟通过体外研究探讨安罗替尼联合放疗对食管癌细胞Eca-109、Kyse-450放射敏感性的影响,进而为后续的分子机制研究和动物实验提供依据。方法:体外培养人食管鳞癌Kyse-410、TE-1、、Eca-109、Kyse-450、Kyse-150、TE-12这6株细胞系,首先根据Western blotting检测六种细胞系中VEGFR2蛋白表达水平,最终筛选Eca-109、Kyse-450作为实验细胞系。CCK-8法验证安罗替尼对Eca-109、Kyse-450细胞的增殖抑制作用,用P值判断药物效果,并利用SPSS统计软件分析出IC20作为后续实验所用药物浓度;通过克隆形成实验验证安罗替尼联合照射后对Eca-109、Kyse-450细胞的作用,通过软件及放射生物学模型计算放射敏感性相关参数及放射增敏比,拟合绘制细胞存活曲线。流式细胞术分别检测各实验组对细胞株Eca-109、Kyse-450的凋亡和周期的影响。结果:1.Western blotting检测六种细胞系中VEGFR2蛋白表达结果显示,Eca-109、Kyse-450中VEGFR2蛋白表达较其他四株细胞蛋白表达的条带峰面积大,Eca-109 VEGF2条带峰面积:21795.86±56.92;Kyse-450 VEGF2条带峰面积:16189.69±44.19,最终选取Eca-109、Kyse-450细胞株作为后续实验研究目标。2.CCK-8实验结果显示:安罗替尼（浓度:5、10、20、40、80μmol/L）作用于两株细胞,结果显示各浓度安罗替尼均可以抑制Eca-109、Kyse-450细胞的活力,随着药物浓度梯度和时间递增,抑制作用呈上升趋势,并表现出浓度依赖性和时间依赖性。通过SPSS软件统计分析出Eca-109、Kyse-450细胞的IC20分别为:（1.30±0.19）μmol/L、（9.79±0.67）μmol/L,并将IC20作为后续实验药物浓度。3.细胞克隆形成实验结果表明:对细胞辐射敏感性的相关指标进行统计,发现安罗替尼联合照射组的Dq、D0均小于单独照射组,并采用单击多靶模型对其生存曲线进行拟合。结果显示:Eca-109细胞:24h AR组SER为1.31,AR组SER为1.15,24RA组SER为1.23;Kyse-450细胞:24AR组SER为1.33,AR组SER为1.08,24RA组SER为1.15。照射前24小时给药的两个细胞的放射增敏效应比照射后24小时和同时加药照射的两个细胞的放射增敏效应更明显。表明安罗替尼可对人食管癌Eca-109、Kyse-450细胞株有放射增敏作用;L-Q模型对其生存曲线进行拟合,测得两个食管癌细胞株α/β比值:Eca-109为4.11Gy、Kyse-450为3.88Gy,α/β比值较低,提示两株食管鳞癌细胞的辐射损伤修复能力强。4.流式细胞检测术结果表明:与单独照射相比,安罗替尼联合照射组均能诱导两株细胞的凋亡率有明显的提高（P＜0.05）。在两株细胞中,安罗替尼联合照射组S期百分比低于单独照射组,G2/M期百分比增加（P＜0.05）,说明加药后进一步加重了射线对食管鳞癌Eca-109、Kyse-450细胞的损伤作用。而且安罗替尼加入后,照射诱导的细胞凋亡明显增加,而且照射前加药的凋亡率最明显。结论:安罗替尼对人食管癌细胞株Eca-109、Kyse-450细胞均可产生抑制作用。单独照射时测得α/β比值较低,两株细胞的辐射损伤修复能力强;而且照射前加入安罗替尼更容易诱导两株细胞凋亡率增加,阻滞细胞周期的进程,进而提高Eca-109、Kyse-450细胞的放射增敏性。因此,安罗替尼联合照射的最佳时间窗为照射前加药,这为晚期食管癌患者在临床治疗过程中提高治疗效果有一定的指导意义。