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实验目的:Lnc RNA HULC通过调控miR-3200-5p/ATF4诱导肝癌细胞铁死亡相关的细胞死亡分子机制。实验方法:HULC siRNA转染于肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞,qRT-PCR检测HULC（肝癌高表达转录本）表达并验证HULC敲低水平。MTT实验检测阴性对照组和敲低组细胞存活率。Western blot实验来检测caspase-3（半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3;）,Bcl-2（白血病-2基因）和MMP-2（基质金属蛋白酶2）的表达水平。转染HULC siRNA后,细胞克隆形成实验检测si-NC组与si-HULC组细胞的克隆形成能力;细胞划痕实验用来检测si-NC组与si-HULC组在0、24、48h细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞不同时期的凋亡水平;铁死亡相关指标MDA（丙二醛）实验检测阴性对照组与敲低组脂质过氧化物分解产物的含量;GSH（谷胱甘肽）实验检测抗氧化剂的水平;ROS（活性氧）实验检测细胞的活性氧水平。验证HULC与miR-3200-5p存在ce RNA调控模式。通过加入mimic/inhibitor miR-3200-5p以及ATF4 siRNA,qRT-PCR验证基因水平上HULC,miR-3200-5p与ATF4的基因表达水平及其之间存在的靶向调控关系;Western blot实验在蛋白水平上验证HULC与miR-3200-5p及ATF4的相关性调控;铁死亡相关指标MDA实验检测丙二醛的含量;GSH实验检测细胞加入mimic/inhibitor miR-3200-5p后谷胱甘肽的含量;ROS试验检测活性氧水平。铁的含量是铁死亡的关键标志,用铁检测试剂盒检测各分组中Fe2+的含量。实验结果:（1）将si-HULC转染与BEL-7402和SMMC-7721细胞中将HULC的表达敲低,与阴性对照相比72h敲低HULC组细胞存活率明显下降,P＜0.01。克隆形成实验结果显示敲低HULC组细胞克隆形成能力较阴性对照组降低;划痕实验结果表明敲低HULC后与对照组相比分别在24h,48h迁移率降低,P＜0.01。（2）流式细胞仪测细胞凋亡情况显示与阴性对照组NC-HULC相比敲低HULC后其凋亡水平增加。Western blot结果显示Bcl-2表达降低,MMP-2表达水平降低,Caspase-3表达升高,以上均与阴性对照相比P＜0.05,差异具有统计学意义;铁死亡相关指标与对照组相比MDA,ROS表达水平增高,抗氧化剂谷胱甘肽GSH表达降低,P＜0.05。（3）低表达HULC后,在基因水平miR-3200-5p的表达水平增高,P＜0.01,差异具有统计学意义。然而通过加入mimic miR-3200-5p,HULC的表达水平下降与阴性对照相比P＜0.05;同时与阴性对照相比铁死亡相关指标GSH水平降低,P＜0.01。当加入inhibitor miR-3200-5p,与阴性对照相比其克隆形成能力增强;蛋白水平检测Bcl-2表达增高,MMP-2表达水平增高,Caspase-3表达水平降低,P＜0.01。铁检测结果发现敲低HULC后与阴性对照相比二价铁的表达含量增高,当si-HULC与inhibitor共转,可以逆转敲低HULC影响的Fe2+升高,P＜0.01。抗氧化剂GSH水平增高,P＜0.01。（4）生物信息学预测结果发现miR-3200-5p与ATF4之间存在靶向调控关系。当加入inhibitor miR-3200-5p,细胞ATF4表达升高;加入mimic miR-3200-5p,ATF4表达水平降低;通过qRT-PCR和western blot实验结果说明miR-3200-5p与ATF4之间存在负性调控关系。（5）通过对铁死亡指标检测结果表明,敲低ATF4,可以降低抗氧化指标GSH的水平。当inhibitor miR-3200-5p与ATF4 siRNA共转,发现加入inhibitor miR-3200-5p后可以逆转ATF4敲低带来的GSH水平降低,P＜0.05。同时加入inhibitor miR-3200-5p后可以逆转ATF4敲低带来的MDA水平升高,P＜0.05。铁检测结果表明加入inhibitor miR-3200-5P后,细胞的Fe2+表达与阴性对照相比相对更低,同时加入si-ATF4可以逆转inhibitor miR-3200-5p影响的Fe2+含量降低,P＜0.05,差异具有统计学意义。因此,ATF4作为miR-3200-5p靶基因诱导肝癌细胞发生铁死亡。实验结论:Lnc RNA HULC通过与miR-3200-5p存在海绵样结构ce RNA发挥功能,且调控miR-3200-5p/ATF4促进肝癌细胞铁死亡相关的细胞死亡。