肝素是从猪小肠粘膜提取的一种带负电荷的线性多糖混合物,由硫酸化的己糖醛酸（Hexuronic acid,HexA）与α-D-葡萄糖胺（Glucosamine,GlcN）形成的二糖重复单元组成,其中的己糖醛酸可能为葡萄糖醛酸或艾杜糖醛酸。肝素作为一种抗凝血药物在临床上的应用非常普遍,一般用于预防和治疗血栓和栓塞形成,其在使用过程中有一定几率引发出血、肝素诱导的血小板减少症（Heparin induced thrombocytopenia,HIT）等不良反应。HIT可进一步导致深静脉血栓及肺栓塞,有可能威胁病人的生命。低分子肝素（Low molecular weight heparins,LMWHs）作为肝素经过化学降解或酶降解后的产物,也被用于预防和治疗血栓栓塞性疾病。与肝素相比,LMWHs具有生物利用度高、半衰期长、副作用小等多种优点。但LMWHs在应用过程中仍有可能发生HIT并导致严重的临床后果。肝素及LMWHs引发HIT的过程与人体内的血小板因子4（Platelet factor 4,PF4）有关,它是一种由血小板α颗粒合成并释放的蛋白质,在体内一般以四聚体的形式存在,其表面存在带正电的区域,能与进入人体内的肝素或LMWHs结合形成PF4-肝素复合物,引发机体的免疫反应,进而介导HIT的发生。PF4四聚体和LMWHs形成复合物的性质（包括复合物大小、比例和电荷等）与后续引发机体免疫反应及介导HIT发生密切相关,因而研究LMWHs与PF4相互作用形成复合物的性质对评价LMWHs的免疫原性、保障用药安全具有十分重要的意义。本论文用多种分析方法从多个角度对PF4与LMWHs形成的复合物进行了研究。首先,采用分子对接技术对PF4蛋白和肝素寡糖进行了模拟对接,从理论上预测PF4蛋白与肝素相互作用所形成复合物的结构;其次,使用尺寸排阻色谱法（Size exclusion chromatography,SEC）研究了三种主要的低分子肝素（依诺肝素钠、那屈肝素钙和达肝素钠）在不同浓度下与PF4结合形成复合物的比例,发现与依诺肝素钠、那屈肝素钙相比,更少摩尔量的达肝素钠就能与PF4形成更多的复合物。然后,使用反相色谱-多反应监测质谱法（Reversed phase-liquid chromatography-multiple reaction monitoring,RP-LC-MRM）对依诺肝素钠和PF4孵育后形成的复合物进行定性及定量分析。结果显示,依诺肝素钠与PF4孵育后形成的复合物中依诺肝素钠与PF4四聚体的组成配比约为1:2。最后,通过纳米粒度-电位仪对PF4与不同浓度下的依诺肝素钠形成的复合物的Zeta电位及粒径进行了分析,并将该粒径与PF4和不同浓度下的肝素钠形成复合物的粒径进行了比较。结果显示,PF4与不同浓度的依诺肝素钠形成的复合物的粒径及Zeta电位有差异,PF4与较低浓度的肝素形成的复合物的粒径比依诺肝素钠形成的复合物粒径更大。本论文的研究结果为更好地理解LMWHs免疫原性的发生机制提供了科学基础,也对提升我国LMWHs药物的质量及安全性有一定价值。