MicroRNA133对心肌细胞内钙的调节机制

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gbyljk008
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目的:研究微小RNAl33(microRNA133,miRNA133)对乳鼠心肌细胞钙浓度的影响及其调节机制。   方法:利用lipofectamine2000将miRNA133,阴性对照miRNA,MT-miRNA133和/或AMO133(miRNA133的反义链)转染到原代培养的乳鼠心肌细胞中,观察心肌细胞搏动频率的变化,采用激光共聚焦技术检测miRNA133对心肌细胞内钙浓度的影响,应用细胞免疫荧光染色方法检测miRNA133对L型钙通道蛋白表达的影响。   结果:与正常对照组相比,转染miRNA133的乳鼠心肌细胞搏动频率明显减慢,转染AMO133后心肌细胞搏动频率明显加快,AMO133消除了miRNA133引起的细胞搏动频率减慢。细胞用Fluro-3处理后,应用激光共聚焦技术检测乳鼠心肌细胞内钙浓度。与对照组相比,转染miRNA133的乳鼠心肌细胞内钙荧光强度明显降低(P<0.05),转染AMO133后细胞内钙荧光强度明显增加(P<0.05),并且AMO133可以消除miRNA133引起的细胞内钙荧光强度的降低。细胞免疫荧光染色结果显示转染miRNA133的乳鼠心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度显著降低(P<0.05同对照组相比),转染AMO133后心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度显著增强(P<0.05),同样AMO133能抵消miRNA133所致的细胞钙通道蛋白荧光强度的降低。在以上各组实验,阴性对照miRNA和MT-miRNA133(突变的miRNA133)均没有产生有意义的作用。   结论:MiRNA133通过抑制乳鼠心肌细胞L型钙通道蛋白的表达而降低心肌细胞内的钙浓度。MiRNA133在乳鼠心肌细胞钙浓度调节中充当重要角色。
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