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[目 的]皮肤创伤是日常生活中的一种常见皮肤损伤形式,但在临床治疗中,如何有效地促进皮肤创伤修复仍是一个巨大的挑战。近年来,两栖动物生物活性多肽被认为是治疗创伤的潜在候选药物,研究其结构,功能及作用机制,对于新型促皮肤创面愈合药物的研发具有重要意义。[方 法]野外捕捉活体云南臭蛙;采用基因组学方法构建臭蛙皮肤的cDNA文库,确定多肽的一级结构(氨基酸序列),进行人工合成;之后进行细胞划痕实验、细胞增殖实验、Transwell迁移实验、动物创伤愈合实验以及组织切片常规染色分析、炎症细胞因子(TNF、TGF-β1)以及表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂实验、溶血实验、急性毒性实验、抗菌活性检测、自由基清除活性检测、样品稳定性等分析。[结 果]1.自云南臭蛙的cDNA文库鉴定出的多肽“OA-GL12”由12个氨基酸组成,从N端到C端的成熟肽序列为“GLLSGINAEWPC”;其前体肽长度为326个碱基对所编码的58个氨基酸残基组成;2.OA-GL12对HaCaT和HSF细胞划痕的愈合有明显的促进作用,且具有明显时间-浓度依赖性;3.OA-GL12促进HaCaT和HSF细胞增殖的活性较弱,但在用丝裂霉素抑制细胞分裂的作用下,其仍有较强的促进细胞划痕愈合的作用;4.OA-GL12能促进HaCaT和HSF细胞迁移;5.OA-GL12能显著促进小鼠全层皮肤创伤的愈合,促进创伤部位表皮、真皮的再生以及肉芽组织的形成;6.与对照组相比,OA-GL12诱导RAW264.7细胞分泌TNF和TGF-β1,且具有浓度依赖性,提示OA-GL12通过促进炎症因子TNF的释放而招募更多的巨噬细胞分泌更多转化生长因子TGF-β1,促进皮肤创伤修复;7.当加入表皮生长因子受体抑制剂(Gefitinib)时,OA-GL12的促进HaCaT细胞划痕修复效果明显下降,表明OA-GL12通过表皮生长因子受体(EGFR)的参与而达到促进细胞划痕修复的作用;8.OA-GL12具有一定的ABTS+以及DPPH自由基清除活性;9.OA-GL12未表现出毒性及溶血反应;10.OA-GL12对多种真菌及细菌均无直接的抗菌作用。[结 论]1.自云南臭蛙皮肤中鉴定出的新型多肽OA-GL12,其成熟肽序列为“GLLSGINAEWPC”;2.在体内,体外,OA-GL12均表现出较明显的促修复活性;3.OA-GL12具有一定的稳定性和抗氧化活性,而无抗菌性、溶血性或急性毒性;4.OA-GL12的促皮肤创面愈合活性与TGF-β1的释放以及EGFR的激活相关。