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目的:最近Joseph P和雷毅雄教授等从镉转化Balb/c-3T3细胞中克隆出鼠蛋白质翻译起始因子3(TIF3)和鼠蛋白质翻译延伸因子1 δ(TEF-1 δ),他们经过功能研究和鉴定认为TIF3和TEF-1 δ是2个新的镉应答原癌基因.本研究在此基础上,利用已建立的结晶型硫化镍诱导转化永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)模型,对结晶型硫化镍转化人支气管上皮细胞和成瘤细胞的TIF3和TEF-1 δ异常表达情况进行检测,以探讨硫化镍致癌相关蛋白翻译因子的变化,这对于进一步阐明镍化合物致癌的分子机理、镍相关肿瘤的早期诊断、高危人群筛选和预防均有一定意义.经检索,这方面的研究国内外未见报道.方法:1.逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术.从GenBank中调出人的蛋白质翻译起始因子3(TIF3)和人的蛋白质翻译延伸因子1 δ(TEF-1 δ)基因,采用GENERUNR软件设计目的基因上下游引物,参照文献合成内参照β-Actin引物.RT-PCR实验采用ThermoScripRT试剂盒和TaKaRa PCRAmplification试剂盒,参照两试剂盒的操作程序对RNA样本进行逆转录(mRNA→cDNA)实验,并以cDNA为摸板进行PCR扩增.RT-PCR产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳,以β-Actin为内对照,初步分析非转化对照细胞、硫化镍转化细胞和成瘤细胞的TIF3基因、TEF-1 δ基因mRNA表达情况.2.敏感先进的荧光定量PCR(FQ-PCR)方法.根据TIF3和TEF-1 δ mRNA全序列,用Primer Express 2.0软件设计TIF3和TEF-1 δ上下游引物及探针.分别将16HBE对照细胞、NiS转化细胞、NiS成瘤细胞的总RNA逆转录成cDNA,采用荧光定量PCR来定量TIF3基因、TEF-1 δ基因mRNA的表达水平.16HBE对照细胞、NiS-转化细胞、NiS-成瘤细胞分别各有3批,同一批细胞均重复三次荧光定量PCR的检测,结果取三次平均值.FQ-PCR进一步对转化细胞、成瘤细胞的TIF3基因、TEF-1 δ基因mRNA表达水平进行定量研究.结论:1.国内外首次发现不溶性结晶型硫化镍在诱发人支气管上皮细胞恶变过程中,存在明显的细胞蛋白质翻译启动因子TIF3异常表达现象,其表达水平与细胞转化,以及细胞的恶变程度密切相关,这可能是结晶型硫化镍诱发人类细胞肿瘤的重要分子致癌机理之一;2.首次观察到硫化镍在诱发人支气管上皮细胞恶变过程中,蛋白质翻译延伸因子TEF-1 δ在镍转化细胞及成瘤细胞中表达水平相对于对照细胞均明显增高,提示TEF-1 δ基因的高表达与硫化镍细胞转化与致癌性密切相关;3.人蛋白翻译启动因子TIF3和译延伸因子TEF-1 δ的异常表达作为金属暴露分子生物标记物的研究,具有一定的前途和应用前景;4.同普通RT-PCR相比,荧光定量PCR在定量检测基因表达方面具有快速、精确和高灵敏性的特点,其应用于实验室研究和人群调查是一种良好的手段.