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目的:检测信号转导与转录激活因子5(Signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)、细胞周期素D1(cyclinD1)和c-myc蛋白在非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)组织和正常肺组织中的表达,初步探讨它们在NSCLC的发生、侵袭和转移中的作用。
方法:利用免疫组织化学SP法检测38例NSCLC组织和20例正常肺组织中STAT5蛋白、cyclinD1蛋白和c-myc蛋白的表达水平。NSCLC组织均为手术切除获得,术前未作任何放疗或化疗。其中,男性25例,女性13例;年龄为23-81岁,<60岁者27例,≥60岁者11例;鳞癌18例,腺癌20例;肿瘤直径≤3cm者11例,>3cm者27例;有淋巴结转移者28例,无淋巴结转移者10例;Ⅰ-Ⅱ期者21例,Ⅲ-Ⅳ期者17例;高-中分化者29例,低分化者9例。标本组织经福尔马林固定,石蜡包埋,4μm厚连续切片,切片常规脱蜡水化后,蒸馏水冲洗,磷酸盐缓冲液(phosphate buffersaline,PBS)浸泡,高温抗原修复,3%H2O2断内源性过氧化物酶活性,并用正常山羊血清封闭交叉反应。滴加一抗(STAT5兔抗人多克隆抗体,鼠抗人cyclinD1单克隆抗体,鼠抗人c-myc单克隆抗体)孵育,PBS冲洗后滴加生物素标记二抗孵育,PBS冲洗后滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液(S-A/HRP)孵育,PBS冲洗,DAB显色,苏木素复染,透明,封片观察。以胞质或胞核内出现棕黄色颗粒、网织状或棕褐色团块为阳性细胞。其中,STAT5蛋白在NSCLC组织中的阳性表达信号主要位于细胞质,少数位于细胞核;cyclinD1蛋白在NSCLC组织中的阳性表达信号主要位于细胞核;c-myc蛋白在NSCLC组织中的阳性表达信号主要位于细胞质。按每张切片的阳性细胞比例及着色深浅划分一、+、++、++十四级,基本不着色或着色细胞少于5%为阴性(-),着色浅淡或着色细胞占5%-5%为弱阳性(+),着色适中或着色细胞占26%~50%为中度阳性(++),着色深或着色细胞大于50%为强阳性(+++)。
结果:(1)STAT5蛋白在NSCLC组织中的表达与在正常肺组织中的表达比较,差异有显著统计学意义(P<0.01),在肿瘤中的表达高于正常肺组织;cyclinD1蛋白在NSCLC组织中的表达与在正常肺组织中的表达比较,差异有显著统计学意义(P<0.01),在肿瘤组织中的表达高于正常肺组织;c-myc蛋白在NSCLC组织中的表达与在正常肺组织中的表达比较,差异有显著统计学意义(P<0.01),在NSCLC中的表达高于正常肺组织;(2)STAT5蛋白在NSCLC组织中的表达与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05):cyclinD1蛋白在NSCLC组织中的表达与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05);同样,在NSCLC组织中,c-myc蛋白的表达也与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05):(3)STAT5蛋白和cyclinDl蛋白在NSCLC组织中的表达呈显著正相关(r=0.328,P=0.044,P<0.05)。(4)STAT5和c-myc蛋白在NSCLC组织中的表达无相关性(r=0.142,P=0.394,P>0.05);(5)cyclinD1蛋白和c-myc蛋白在NSCLC组织中的表达无相关性(r=0.279,P=0.089,P>0.05)。
结论:(1)STAT5蛋白在NSCLC中的表达增高,显著高于正常肺组织,同样,在NSCLC中cyclinD1蛋白和c-myc蛋白的表达也是增高的并且显著高于正常肺组织,说明过度表达的STAT5蛋白、cyclinD1蛋白和c-myc蛋白可能均参与了非小细胞肺癌的形成过程。(2)STAT5蛋白、cyclinD1蛋白和c-myc蛋白在NSCLC中的表达与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移和TNM分期无关,提示它们可能只在肿瘤发生过程中发挥作用,而与肿瘤侵袭和转移无关。(3)STAT5蛋白与cyclinD1蛋白在NSCLC中的表达呈正相关,提示STAT5可能是通过上调cyclinD1的表达,从而促进细胞周期进展和细胞的恶性转化,促进肿瘤的形成。(4)在NSCLC中,STAT5蛋白与c-myc蛋白的表达之间无相关性,说明c-myc可能并没有通过STAT5信号途径或者是通过其它的方式来诱导肿瘤的发生。(5)在NSCLC中,cyclinD1蛋白与c-myc蛋白的表达之间无相关性,说明它们在促进细胞转化,导致肿瘤的发生过程可能是各自独立发挥作用的,无协同作用。