目前益生菌抗病毒作用的存在已被广大学者所了解，其菌群中特别是嗜酸乳杆菌具有较明显的抗致病微生物性质。本实验研究嗜酸乳杆菌S层蛋白在抗病毒作用中参与的程度以及作用原理，建立适合研究益生菌的原代肠上皮细胞为平台对嗜酸乳杆菌抗病毒的效果和S层蛋白在抗病毒作用中参与的程度做相关研究，以期为益生菌的后续研究提供一定的理论依据。实验首先对嗜酸乳杆菌的S层蛋白进行基因和蛋白提取鉴定，实验结果显示菌体存在S层蛋白基因大小为1200bp，使用中性LiCl提取菌体S层蛋白后利用SDS-PAGE分析所提蛋白大小为45ku且蛋白纯度较高，与文献报道一致。蛋白纯化后制备抗S层蛋白兔多克隆血清抗体，经Elisa方法检测血清抗体效价为1.0×105，能够满足实验后续要求。对于鸡肠上皮细胞的原代培养，选用20日龄即将出壳的SPF鸡胚，使用刮取法获得肠绒毛和隐窝单位，使用胶原蛋白酶Ⅰ和Ⅳ联合消化后放入预先铺有胶原蛋白的96孔细胞培养板里，按照一定的细胞接种密度，两个鸡胚可以铺满一块96孔细胞板，使用与成纤维细胞共同培养的方法进行IEC培养。为了评价S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中参与抗病毒的程度，设置以下实验组：组1将菌体不同成分先接触IEC，共同孵育1h使其充分作用，使用缓冲液洗去其他成分后加入病毒孵育1h，再洗去病毒成分，加入细胞维持液继续培养细胞，直至病毒对照组出现细胞病变（CPE）为止，停止细胞培养，进行MTT检测细胞活力；组2先加入病毒，后加入菌体各个成分，具体步骤同上；组3将菌体成分与病毒先孵育1h后一同加入细胞中三者共同孵育1h，之后洗去成分加入细胞维持液继续培养，直至病毒对照组出现细胞病变（CPE）为止，停止细胞培养，进行MTT检测细胞活力。实验结果显示，S层蛋白对病毒抑制性最强，菌体其次，脱S层蛋白菌体次之，代谢产物抑制病毒率最低。S层蛋白之所以高于嗜酸乳杆菌的病毒抑制率，因在IEC可承受范围内其蛋白浓度大于嗜酸乳杆菌中菌体表面的S蛋白含量，故在抑制率的数值上比菌体作用明显；脱S层蛋白菌体和全菌体相比，前者抑制率低于后者，可见，在菌体抑制病毒作用中S层蛋白起了明显作用；从代谢产物的病毒抑制率来看，菌体的次级代谢产物仍有一定的抗病毒性质。通过与其他成分的比较可见，菌体对病毒的抑制作用是多方面共同发挥的结果，S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中发挥了不可忽视的作用。4种菌体成分的组1和组3实验中两种病毒抑制率都高于组2实验，说明当病毒感染细胞，益生菌成分无法起到明显的抑制病毒增殖作用。组1实验与组3实验相比，不同成分有所差别。对于S层蛋白，先加蛋白，后加病毒时，蛋白才能阻止其感染细胞，病毒感染细胞后再加入S蛋白几乎没有明显效果。这意味着S层蛋白只能在病毒感染前期起到抗病毒感染作用，这说明S层蛋白具有预防病毒感染效果；而当病毒感染细胞后，S层蛋白对已受病毒侵染的细胞却没有治疗效果，可见，S层蛋白发挥抗病毒作用的时期为病毒入侵细胞之前。菌体最高的病毒抑制率出现在组3和组1组中，菌体的组2病毒抑制率明显高于S蛋白组、脱S菌体组和代谢产物组，说明菌体的综合抗病毒能力强于各自成分，并对以感染病毒的IEC有一定的保护作用。为了进一步研究S层蛋白与病毒之间的作用关系进行下列实验。实验1借鉴间接ELISA方法检测病毒与S层蛋白的粘附性，选择牛血清白蛋白作为阴性对照；实验2评价牛血清白蛋白有无病毒抑制性，方法同S层蛋白的病毒抑制实验。实验结果显示，S层蛋白与白蛋白都能粘附IBV和NDV，但是只有S蛋白对病毒具有显著的抑制性，白蛋白没有明显的抑制性，说明S层蛋白对病毒的粘附确实影响并阻碍了病毒对肠上皮细胞的感染，具有抑制IBV和NDV感染IEC的能力。综上所述，菌体对病毒的抑制作用是多方面共同发挥的结果，S层蛋白在嗜酸乳杆菌抗病毒作用中发挥了明显作用。进一步研究S层蛋白与病毒之间的作用关系实验结果说明S蛋白对病毒的粘附作用起到了抑制病毒感染的效果，产生的S蛋白-病毒复合体阻碍了病毒对IEC的感染。目前对于S层蛋白的研究还有大量的工作要做，本研究仅对益生菌中嗜酸乳杆菌S层蛋白在鸡原代肠上皮细胞中进行的抗病毒研究，由于益生菌S层蛋白的多样性和细胞平台的多选择性，对于S层蛋白更全面的认识还需要更深入的研究。