青稞LTPs基因家族的克隆与功能研究

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植物脂质转运蛋白(lipid transfer proteins,LTPs)广泛存在于植物中,是一种调控植物多个生长发育过程并与脂质转移、角质层形成以及胁迫响应相关的小分子碱性蛋白。本研究首先对大麦中的LTPs基因家族进行了全基因组分析,然后再利用PCR技术从青稞‘肚里黄’中克隆得到16个LTPs家族基因,并对这16个从青稞中克隆获得的LTPs家族基因序列进行生物信息学分析,也对该家族基因的组织和胁迫表达模式进行了研究。同时为深入探究Ht LTP基因在青稞抗逆生理中的作用,构建了4个Ht LTP基因表达载体,进而开展拟南芥转基因研究,为进一步研究Ht LTP的功能提供支撑。主要研究结果如下:1.大麦中的LTP基因家族进行了全基因组分析,共鉴定出40个LTP基因,可分为4种类型(1、2、D和G),并对40个大麦LTPs的理化特性、蛋白序列、系统进化、基因及蛋白结构、染色体分布、种间种内的共线性、上游顺式元件及表达模式等的预测和分析,发现40个LTP基因符合LTP特性且表达的模式呈现出组织特异性。此外,LTP基因响应非生物胁迫的表达模式表明大麦中的LTP基因与胁迫抗性有关。2.青稞中克隆得到16个LTPs家族基因,脂质转运蛋白命名为Ht LTP1-10,脂质转运类似蛋白命名为Ht LTP-like1-6。并预测青稞LTPs家族基因蛋白的理化特性、氨基端信号肽、跨膜区、蛋白二、三级结构及系统进化。3.对该家族基因的表达模式进行了研究,青稞LTPs基因在根、茎、叶、种子、花中表现出组织差异性。不同胁迫条件下,冷胁迫、干旱胁迫、盐胁迫后,分别有8、4、6个青稞Ht LTP基因在叶中相对表达量显著上调。表明16个青稞LTP基因符合LTP特性。且青稞LTP基因响应非生物胁迫的表达模式表明Ht LTP基因与胁迫抗性有关。4.为深入探究Ht LTP基因在青稞抗逆生理中的作用,构建了4个青稞LTPs超表达载体,通过浸花法侵染拟南芥并进行阳性筛选,得到Ht LTP1转基因拟南芥植株,并进行表型观察及生理分析。发现拟南芥转基因植株叶片变小,花发育提前。旱胁迫下Ht LTP1在转基因材料中过表达加强细胞膜的稳定性,增强SOD、POD、CAT活性方面具有明显作用。
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