【摘 要】
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目的:从1型味觉受体信号通路探索清化颗粒促进肠组织合成胰高血糖素肽1的可能机制,为筛选中药组分提供基础。方法:以db/db糖尿病小鼠为研究对象,采用区组随机法将45只db/db小鼠平均分为3组:生理盐水组（模型）、果糖组（阳性对照）、清化颗粒组。实验在上海中医药大学实验动物中心进行,操作严格遵照实验动物伦理规定。每周记录小鼠生长情况,测量空腹血糖和体重。灌胃干预4周后,鉴于取材限制,各组随机抽取部
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（8177150580）；
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目的:从1型味觉受体信号通路探索清化颗粒促进肠组织合成胰高血糖素肽1的可能机制,为筛选中药组分提供基础。方法:以db/db糖尿病小鼠为研究对象,采用区组随机法将45只db/db小鼠平均分为3组:生理盐水组（模型）、果糖组（阳性对照）、清化颗粒组。实验在上海中医药大学实验动物中心进行,操作严格遵照实验动物伦理规定。每周记录小鼠生长情况,测量空腹血糖和体重。灌胃干预4周后,鉴于取材限制,各组随机抽取部分小鼠分别执行以下操作:腹腔糖耐量试验,腹主动脉采血分离血清,收集空肠、胰腺标本。根据腹腔糖耐量试验各时间点毛细血管血糖计算曲线下面积;ELISA法检测糖化血红蛋白、胰岛素和胰高血糖素肽1（Glucagon-like peptide1,GLP-1）的血清浓度;免疫组织化学法检测肠组织GLP-1蛋白的表达;Western blot法检测胰腺组织胰十二指肠同源盒1蛋白表达和肠组织GLP-1、1型味觉受体（Taste receptors type 1,TAS1Rs）及下游信号因子（味转导素α、磷脂酶Cβ2、瞬时感受器电位阳离子通道蛋白5、环磷酸腺苷）的蛋白表达;RT-PCR法检测上述观测指标的m RNA表达。结果:1.清化颗粒对GLP-1外周效应的影响。（1）糖代谢:干预前各组小鼠空腹血糖无差异（P＞0.05）。灌胃4周后,空腹血糖在清化颗粒组下降（?=-2.6±2.7mmol/L,P＜0.05）,生理盐水组上升（?=6.4±3.7mmol/L,P＜0.05）,果糖组无变化（P＞0.05）;清化颗粒组空腹血糖低于生理盐水组（P＜0.05）;清化颗粒组和果糖组曲线下面积均小于生理盐水组（P＜0.05）;清化颗粒组糖化血红蛋白（85.1±21.3%）和果糖组糖化血红蛋白（87.4±13.7%）均低于生理盐水组（120.6±28.8%）（P＜0.05）。（2）体重:干预前各组小鼠体重差异（P＞0.05）。灌胃4周后,小鼠体重在清化颗粒组下降（?=-4.0±3.1g,P＜0.05）,生理盐水组无变化（P＞0.05）,果糖组下降（?=-3.1±1.9g,P＜0.05）;清化颗粒组小鼠体重低于生理盐水组（P＜0.05）。2.清化颗粒对肠组织合成GLP-1的影响。（1）GLP-1:清化颗粒组小鼠GLP-1血清浓度（2.0±0.3ng/m L）高于生理盐水组（1.5±0.2ng/m L）（P＜0.05）;果糖组和清化颗粒组的GLP-1蛋白和m RNA表达量均高于生理盐水组（P＜0.05）;相比生理盐水组,清化颗粒组小鼠GLP-1蛋白表达量增加了72%（P＜0.05）,m RNA表达量增加了73%（P＜0.05）;免疫组化结果显示清化颗粒组GLP-1蛋白表达较生理盐水组增多127%（P＜0.05）;（2）胰岛功能:清化颗粒组小鼠胰岛素血清浓度（1.3±0.2ng/m L）高于生理盐水组（1.0±0.2ng/m L）和果糖组（1.1±0.2ng/m L）（P＜0.05）;胰十二指肠同源盒1蛋白和m RNA表达量存在组间差异（P＜0.05）,相比生理盐水组,清化颗粒组胰十二指肠同源盒1蛋白表达量增加了71%（P＜0.05）,m RNA表达量增加了43%（P＜0.05）。3.清化颗粒对TAS1Rs及下游信号因子的影响。（1）TAS1Rs:清化颗粒组和果糖组TAS1R1和TAS1R2的蛋白和m RNA表达量高于生理盐水组（P＜0.05）,相比生理盐水组,清化颗粒组TAS1R1蛋白表达量增加了92%,m RNA表达量增加了211%;清化颗粒组小鼠TAS1R2蛋白表达量增加了216%,m RNA表达量增加了143%;TAS1R3蛋白和m RNA表达量在各组间无差异（P＞0.05）;（2）TAS1Rs下游信号因子:味转导素α、磷脂酶Cβ2和瞬时感受器电位阳离子通道蛋白5的蛋白和m RNA表达量在各组间存在差异,果糖组和清化颗粒组高于生理盐水组（P＜0.05）;环磷酸腺苷的蛋白和m RNA表达量在各组间比较无差异（P＞0.05）。结论:清化颗粒可能通过激活TAS1Rs（TAS1R1、TAS1R2）及其下游信号因子,促进db/db小鼠肠道GLP-1的合成。
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