【摘 要】
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目的:探讨不同紫外线A(UVA)参数下角膜胶原交联(CXL)联合伏立康唑治疗兔真菌性角膜炎的疗效。方法:选用32只2.5-3.0Kg的雄性新西兰大白兔,在标准环境下喂养,使用角膜基质注射法注射50μL浓度为106集落形成单位(CFU)/mL烟曲霉菌悬浊液诱导真菌性角膜炎(右眼注射)。通过角膜共聚焦显微镜检查是否发现菌丝来评判造模效果。造模72h后角膜共聚焦显微镜检查发现菌丝的实验兔视为造模成功,成
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目的:探讨不同紫外线A(UVA)参数下角膜胶原交联(CXL)联合伏立康唑治疗兔真菌性角膜炎的疗效。方法:选用32只2.5-3.0Kg的雄性新西兰大白兔,在标准环境下喂养,使用角膜基质注射法注射50μL浓度为10~6集落形成单位(CFU)/mL烟曲霉菌悬浊液诱导真菌性角膜炎(右眼注射)。通过角膜共聚焦显微镜检查是否发现菌丝来评判造模效果。造模72h后角膜共聚焦显微镜检查发现菌丝的实验兔视为造模成功,成模后一天起记为干预第1天。实验兔随机分为4组:A组空白组,n=8;B组药物组,n=8;C组药物联合常规交联组,n=8;D组药物联合快速交联组,n=8。各组处理如下:(1)空白组:不给予任何抗真菌处理;(2)药物组:干预第1天起1%伏立康唑滴眼液点眼,3h/次,1天4次;(3)药物联合常规交联组:成模当天使用强度为3 mW/cm~2的UVA和0.1%的核黄素进行去上皮交联,照射时间为30min,干预第1天起1%伏立康唑滴眼液点眼,3h/次,1天4次;(4)药物联合快速交联组:成模当天使用强度为9 mW/cm~2的UVA和0.1%的核黄素进行去上皮交联,照射时间为10min,干预第1天起1%伏立康唑滴眼液点眼,3h/次,1天4次。在干预前、干预第1,4,7,14,21和28天依次进行裂隙灯显微镜检测与眼前节拍照、荧光素钠染色(FL)、角膜浑浊度与新生血管评分、光学相干断层扫描(OCT)与角膜溃疡深度分级和角膜共聚焦显微镜(IVCM)检查。干预28天后各组均处死并摘取眼球,对角膜行苏木精-伊红染色(HE)及六胺银染色(PASM)。计量资料组间比较采用采用多重比较的单因素方差分析,组内比较采用配对t检验,等级资料比较采用独立样本Kruskal-Wallis检验。结果:在处理前,各组溃疡面积、溃疡深度、角膜浑浊度评分与角膜新生血管评分等指标之间差异均无统计学意义(P>0.05)。实验结束时A、B两组间溃疡面积仍然没有统计学差异(P>0.05),C组溃疡面积相对A组较小(P<0.05)但相对B组没有统计学差异(P>0.05),D组溃疡面积相对A、B两组均减小(P<0.05)。实验结束时四组溃疡深度分级评分显示C、D两组溃疡深度等级评分低于A、B两组,差异有统计学意义(P<0.05),但是A与B两组之间溃疡深度分级评分无统计学差异(P>0.05)。实验结束时C、D两组角膜新生血管评分和角膜浑浊度评分低于A组,差异有统计学意义(P<0.05),A、B两组之间角膜新生血管评分和角膜浑浊度评分无统计学差异(P>0.05)。共聚焦显微镜检查结果显示A、B两组感染持续时间无统计学差异(P>0.05),C组感染持续时间短于A、B两组,差异有统计学意义(P<0.05),而D组感染持续时间则短于A、B和C三组,差异有统计学意义(P<0.05)。A、B、C和D组四组愈合率分别为12.5%,12.5%,62.5%,87.5%,A、B和C三组之间愈合率差异无统计学意义(P>0.05),而D组愈合率高于A、B二组(P<0.05)。A、B、C和D组四组角膜穿孔率分别为62.5%,37.5%,12.5%和0%,A组与B组之间穿孔率差异无统计学意义(P>0.05),而C、D二组穿孔率低于A组(P<0.05)。HE染色示干预28天后A组角膜溃疡未愈合,镜下几乎全为坏死组织,全层结构破坏伴弥漫性增厚及炎症细胞大量浸润,角膜上皮不明显,基质层成纤维细胞大量增生,局部可见新生血管,B组角膜溃疡未愈合,坏死约1/2角膜厚度,角膜全层弥漫性增厚伴炎症细胞大量浸润,角膜上皮不明显,局部可见新生血管,C组溃疡较小,深度小于1/4角膜厚度,新生血管及纤维母细胞增生,炎症细胞较少,D组溃疡几乎愈合,但仍可见炎症细胞浸润,可见新生血管及纤维母细胞增生。六胺银染色可见A、B两组干预28天后仍可见真菌菌丝,C、D两组干预28天后不可见真菌菌丝。结论:角膜基质注射法建立兔真菌性角膜炎成功率高,CXL联合药物治疗真菌性角膜炎有效。此外药物联合快速交联总体疗效优于药物联合常规交联。
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