硼酸功能化碳点对食源性致病菌检测及其抗菌效应的研究

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作为一类新的碳纳米材料,碳点自被发现以来就引起了研究者的广泛关注。由于碳点具有低毒性和生物相容性,它已被广泛用于细胞成像、传感、抗菌等领域。硼酸能与二醇基团形成可逆的共价键,通常用于鉴定糖类和糖基化生物分子。基于硼酸对细胞壁肽聚糖、脂多糖含量不同的革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的特异性识别机制,设计合成了一种低毒、稳定的硼酸基功能化碳点,分别实现了对革兰氏阳性菌的特异性检测和对革兰氏阴性菌的高效杀菌,用于应对食源性致病菌感染及耐药性产生的问题。主要研究内容和结果为以下两个方面:一、硼酸功能化碳点灵敏检测革兰氏阳性菌的研究基于纳米级碳量子点优良的荧光特性、硼酸基团对细菌表面糖基结构的特异性捕获能力,设计合成了一种用于革兰氏阳性菌检测的硼酸基功能化荧光碳点(boronic acid group functionalized carbon dots,B-CDs)。B-CDs具有明亮且稳定的蓝色荧光,是一种较为理想的荧光分析检测信号探针。通过对照荧光试验,证明了B-CDs对革兰氏阳性菌的结合能力显著强于其对革兰氏阴性菌的结合能力。这一结合能力的差别可能是由于来自不同种细菌细胞包壁上糖基结构的不同。考察B-CDs合成原料比例、合成温度、p H值、菌悬液/B-CDs体积比、孵育时间对B-CDs与革兰氏阳性菌结合效果的影响,获得了B-CDs对革兰氏阳性菌的最优检测方法。该方法检测革兰氏阳性菌的线性范围达2.6×10~1-5.2×10~6 CFU/m L,最低检测限低至7 CFU/m L。该方法还具有操作简单、成本低廉的优点,在革兰氏阳性菌的特异性灵敏检测方面具有很大的潜力。二、硼酸功能化碳点对革兰氏阴性菌抗菌作用的研究通过一步水热法制备了表面带负电荷的B-CDs,通过试验确认其对革兰氏阴性菌表现出优良的抗菌活性。通过扫描电子显微镜(SEM)、圆二色光谱表征,确认了B-CDs对革兰氏阴性菌的抗菌机制主要为破坏细菌细胞膜和损伤细菌遗传物质。优化了合成B-CDs的合成条件、与目标细菌的孵育时间,获得了B-CDs对革兰氏阴性菌的最佳杀菌条件。在最佳条件下,B-CDs对于革兰氏阴性菌具有良好的抗菌活力,其最小杀菌浓度(MBC)达到12.5μg/m L。此外,在He La细胞中加入250μg/m L(20倍MBC浓度)B-CDs培养24 h后,细胞活力保持在85%以上,说明B-CDs具有极低的细胞毒性。结果表明,作为新型抗菌碳点,B-CDs表现出了对革兰氏阴性菌高效特异的抗菌性能,为拓展安全、低毒碳纳米材料抗菌剂的研发提供了新的思路。
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