油菜素内酯（Brassinosteriods,BRs）是甾醇类植物激素,具有高效、广谱以及无毒的特性,是能够调节果实成熟的一种新型植物激素,在较低的含量下就可以表现出很高的生理效应,葡萄浆果经过外源BRs处理,葡萄果皮花色苷等酚类物质的含量显著增加,BRs充分发挥调节作用,使去磷酸化状态的BZR1/BES1在细胞内诱导下游靶基因的表达。VviBZR1是BRs信号转导过程中关键的转录因子,正向调节BRs信号通路,但是在BR信号转导过程中,VviBZR1基因调控葡萄花色苷合成的分子机理,目前还不清楚。在葡萄果皮花色苷的合成过程中,VviMYB5b为花色苷合成的调节基因,VviMYB5b有利于调控葡萄花色苷的生物合成和促进花色苷合成途径中CHS,F3’5’H,DFR,ANS等结构基因的表达。课题组前期研究发现,在葡萄果皮花色苷的合成过程中,VviBZR1与VviMYB5b基因的表达趋势大致相同,推断VviBZR1与VviMYB5b基因可能共同作用调控葡萄果皮中花色苷的生物合成,因此,研究VviBZR1与VviMYB5b转录因子互作关系,对于进一步深入研究VviBZR1与VviMYB5b互作调控酿酒葡萄果皮花色苷合成的分子机制具有重要意义。本试验以赤霞珠（Vitis vinifera L.‘Cabernet Sauvignon’）为材料,克隆葡萄果皮中VviBZR1和VviMYB5b基因,进行生物信息学及亚细胞定位分析,利用酵母双杂交及双分子荧光互补试验（Bi FC）研究VviBZR1和VviMYB5b蛋白互作,为VviBZR1和VviMYB5b调控葡萄果皮花色苷的合成提供理论依据。主要研究结果如下:（1）VviBZR1与VviMYB5b的定位与分析。亚细胞定位结果显示VviBZR1-1,VviBZR1-2,VviBZR1-3,VviBZR1-4和VviMYB5b均定位在细胞核中,发挥转录因子的作用;VviMYB5b基因序列的总长度为1103 bp,含有R2R3MYB蛋白典型的基本结构域;VviBZR1的四个同源基因分别命名为VviBZR1-1,VviBZR1-2,VviBZR1-3和VviBZR1-4,基因序列的总长度分别为1368 bp,1235 bp,1071 bp和1820 bp;VviBZR1的四个同源基因的相似性为25.11%,与VviBZR1-4亲缘关系最近的是拟南芥At BZR1-4;VviMYB5b与葡萄中VviMYB5a亲缘关系最近。（2）分析VviBZR1和VviMYB5b蛋白的相互作用。观察pGADT7-VviMYB5b重组质粒和pGADT7空质粒分别转化Y2H Gold酵母菌株感受态并涂SD/-Leu平板,结果显示含有转化与未转化的质粒的酵母菌菌落生长状态完全相同,即诱饵重组质粒对酵母无毒性,同样观察p GBKT7-VviBZR1重组质粒和p GBKT7空质粒分别转化Y2H Gold酵母菌感受态,并涂SD/-Trp的平板,结果显示重组质粒对酵母无毒性;将p GADT7-VviMYB5b质粒转化Y2H Gold酵母菌株感受态,稀释不同浓度涂布于SD/-Leu、SD/-Leu/-Trp、SD/-Leu/-Trp/X-α-Gal、SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/Ab A平板,同样观察p GBKT7-VviBZR1在SD/-Trp、SD/-Trp/X、SD/-Trp/A/X平板上的生长情况,均显示无自激活,酵母双杂交互作试验结果表明,只有VviBZR1-4和VviMYB5b蛋白存在互作关系;双分子荧光互补实验（Bi FC）分析VviBZR1与VviMYB5b二者之间的体内互作关系,通过激光共聚焦显微镜观察重组质粒在拟南芥原生质体中的荧光信号,发现只有在拟南芥原生质体中共转VviBZR1-4与VviMYB5b质粒,细胞核才出现黄色荧光信号,从而验证了VviBZR1-4与VviMYBb蛋白的互作关系,而VviBZR1-1,VviBZR1-2,VviBZR1-3与VviMYB5b蛋白不存在互作关系。