目的探究过量的锌对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其潜在机制,并进一步探究CRIP1是否通过转运锌离子调控GSK-3β/m TOR信号通路影响EMT进程,从而影响结直肠癌细胞的侵袭和转移。方法1.使用不同浓度（0μM、0.5μM、5μM、10μM、50μM、100μM、125μM、150μM、200μM）的Zn SO4处理SW620和Lo Vo细胞24小时,计算细胞存活率,选择3个对细胞的抑制率不大的浓度进行后续的实验;2.分别使用3个不同浓度的Zn SO4处理细胞12、24、48小时,利用锌离子检测试剂盒检测胞浆内的锌离子含量,并利用Western blot检测不同锌离子浓度及不同处理时间对细胞内GSK-3β/m TOR信号通路相关蛋白表达的影响;3.利用Transwell迁移和侵袭实验检测Zn SO4及特异性m TOR信号通路抑制剂（雷帕霉素）处理对SW620和Lo Vo细胞的迁移和侵袭能力的影响,并利用Western blot检测EMT相关标记物的表达变化情况;4.通过转染si CRIP1干扰CRIP1表达,检测SW620和Lo Vo细胞胞内锌离子浓度的改变,并利用Western blot检测si CRIP1转染后,GSK-3β/m TOR信号通路相关蛋白和EMT相关标记物的表达变化情况;5.转染si CRIP1干扰CRIP1表达后,用Zn SO4处理SW620和Lo Vo细胞,利用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化,并利用Western blot检测E-cadherin、Vimentin和GSK-3β、p-GSK-3β、m TOR、p-m TOR蛋白的表达情况。结果1.浓度为5μM、10μM、50μM的Zn2+对细胞增殖的抑制率均＜5%,而100μM、125μM、150μM、200μM浓度的Zn2+显著抑制SW620和Lo Vo细胞的存活率。2.外源性添加5μM、10μM、50μM浓度的Zn2+能够使SW620和Lo Vo细胞中锌含量、GSK-3β和m TOR的磷酸化水平显著增加,其中,50μM浓度的Zn2+时促进效果最为明显。50μM浓度的Zn2+可以从12至48小时增加细胞内锌含量,且在24小时作用达到峰值。50μM浓度的Zn2+可以时间依赖性的促进GSK-3β和m TOR的磷酸化水平。3.50μM浓度的Zn2+处理可以显著增加迁移和侵袭细胞的数量,同时降低上皮标记物E-cadherin的表达水平,并相应地增加间充质标记物Vimentin的表达,而雷帕霉素能够减轻外源性Zn2+对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力和EMT过程的促进作用。且与对照组相比,雷帕霉素可以抑制细胞迁移和侵袭能力以及EMT标记物的表达4.与si NC转染组相比,si CRIP1转染能够降低细胞内的锌离子含量,显著提高上皮标记物E-cadherin的表达水平,并相应地降低间充质标记物Vimentin的表达水平,并显著降低细胞内GSK-3β和m TOR的磷酸化水平。5.si CRIP1转染联合补锌组(si CRIP1+Zn2+)的迁移和侵袭细胞数量显著少于si NC转染组联合补锌组(si NC+Zn2+)。与si NC+Zn2+组相比,si CRIP1+Zn2+组中上皮标记E-cadherin的蛋白水平升高,间充质标记Vimentin以及GSK-3β和m TOR的磷酸化水平降低。结论50μM锌离子通过GSK-3β/m TOR信号通路诱导的EMT促进SW620和Lo Vo细胞的迁移和侵袭能力。沉默CRIP1可能通过抑制细胞中50μM锌离子诱导的迁移和侵袭,抑制结直肠癌的进展。