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目的:①探讨四跨膜蛋白超家族成员1（Transmembrane-4 L-six family member-1,TM4SF1）在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的表达及临床意义。②研究TM4SF1调控ESCC转移的分子机制。方法:首先利用生物信息学方法,通过TNM plot在线数据库分析食管癌（esophageal cancer,EC）患者的肿瘤组织（tumor,T）及正常组织（normal,N）中TM4SF1基因的表达差异。收集35例ESCC患者的新鲜组织标本,采用蛋白质免疫印迹（western blot,WB）和实时荧光定量 PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）分析 TM4SF1在蛋白和mRNA水平的表达差异。收集109对ESCC患者的组织石蜡标本,通过免疫组织化学染色（immunohistochemistry,IHC）检测TM4SF1的表达,根据TM4SF1表达情况分为高表达组和低表达组,并分析其与ESCC患者临床病理资料的相关性,多因素COX 比例风险回归模型分析ESCC患者预后不良的危险因素。其次,利用WB方法检测人类食管上皮细胞（human esophageal epithelium cells,HEEC）和不同 ESCC 细胞系（TE-1,KYSE-510,KYSE-410 和 Eca109）中 TM4SF1的表达差异。构建TM4SF1过表达、敲低以及敲低后再恢复表达的稳转细胞株。利用细胞粘附实验检测肿瘤细胞与不同细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的粘附能力,Transwell实验观察层黏连蛋白（laminin）包被的不同食管癌细胞迁移能力。接下来,通过免疫共沉淀（immunoprecipitation,IP）检测与TM4SF1存在相互作用的受体蛋白,WB检测TM4SF1干扰表达后下游信号通路的变化,再次采用WB和Transwell实验验证TM4SF1-整合素（integrin）复合物影响的下游信号通路和细胞迁移功能。最后,利用IHC和Kaplan-Meier曲线检测并分析TM4SF1、integrin α6和下游关键信号通路转导分子表达情况及其与ESCC患者生存预后的关系。结果:①TM4SF1在ESCC组织中的表达情况及其与临床病理资料的关系:通过TNM plot在线数据库分析发现T组中TM4SF1基因表达水平明显高于N组（P=1.42e-06）。在ESCC患者新鲜组织标本和石蜡标本中,T组TM4SF1的表达水平明显高于N组（P＜0.001）,并与患者的临床TNM分期（P=0.016）、淋巴结转移（P=0.027）、分化程度（P=0.031）和肿瘤大小（P=0.023）明显相关,并且TM4SF1高表达是ESCC患者预后不良的危险因素（P=0.006）。②体外研究TM4SF1表达对ESCC细胞迁移能力的影响:首先WB检测TM4SF1在HEEC和不同ESCC细胞系中表达,结果显示内源性TM4SF1在Eca109细胞株中相对低表达,在KYSE410细胞株中相对高表达。基于此,我们成功构建了 TM4SF1过表达的 Eca109 细胞（TM4SF1-Overexpression,TM4SF1-OE）、敲低表达的 KYSE-410细胞（TM4SF1-sh#1,TM4SF1-sh#2）及敲低后再恢复TM4SF1表达的KYSE-410细胞（TM4SF1-Rescue,TM4SF1-Res）。细胞粘附实验发现:Laminin介导的细胞粘附能力在TM4SF1-OE细胞中明显增强。Transwell实验结果显示:在laminin包被条件下,与对照组（contro1con）细胞相比,TM4SF1-OE组细胞的迁移能力明显增强（P＜0.001）,TM4SF1-sh组细胞的迁移能力明显降低（P＜0.01）,并且这种抑制作用伴随TM4SF1表达的恢复而逆转（P＜0.01）。③体外研究TM4SF1对ESCC细胞下游信号通路的影响及分子机制:IP结果提示TM4SF1与integrin α6β4和α6β1之间存在相互作用,并且这种相互作用在laminin包被条件下进一步增强。WB检测结果显示:TM4SF1-OE组ESCC细胞株中黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）/磷脂酰肌醇 3-激酶（phosphoinositide-3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）信号通路呈现活化趋势。过表达TM4SF1-Integrinα6复合物显著增强下游FAK/PI3K/AKT信号通路的活化以及ESCC细胞的迁移能力（P＜0.05）,相反,在 TM4SF1-OE 细胞中敲低 integrin α6（integrin α6-sh#1,integrin α6-sh#2）可观察到明显的抑制作用（P＜0.001）,在此基础上重新恢复integrin α6（integrinα6-Res）的表达后这种抑制作用被逆转（P＜0.001）。④ESCC标本中检测并分析TM4SF1、integrin α6及下游关键信号通路转导分子的表达情况及其与患者生存预后的关系:结果显示TM4SF1表达与integrin α6（P=0.008）、磷酸化FAK（phosphorylated FAK,p-FAK）（P=0.034）和 integrin α6+p-FAK（P＜0.001）表达呈明显正相关。Kaplan-Meier曲线分析结果显示:TM4SF1（P=0.004）、integrin α6（P＜0.001）及p-FAK（P=0.003）高表达组患者的总生存期均明显缩短。结论:本研究证实TM4SF1通过与integrin α6相互作用活化下游信号通路,参与laminin介导的ESCC细胞转移。研究结果阐明了 TM4SF1-Integrin α6膜功能复合物在ESCC转移过程中的重要性,为其将来作为ESCC转移及预后评估标志物和潜在治疗靶点提供了理论依据。