精液冷冻保存技术是山羊繁育体系的重要组成部分,可以有效保存优质种质资源并加速山羊育种工作进程。但山羊精子在冷冻过程中会受到氧化应激、冷应激等不利因素的损伤,导致山羊精子的解冻后质量较低,大大限制了山羊冻精的应用。已有大量研究表明,在精液冷冻保存过程中添加氨基酸类物质可以有效提高精子的冷冻-解冻后质量。课题组前期通过对内蒙古绒山羊高抗冻（High Freezability,HF）精液和低抗冻（Low Freezability,LF）精液的蛋白质组-代谢组学联合分析,发现谷氨酰胺、苯丙氨酸、亮氨酸可以作为内蒙古绒山羊精液抗冻性的潜在生物标记。因此,本研究旨在探究在稀释液中分别添加不同浓度的谷氨酰胺、苯丙氨酸、亮氨酸对冷冻-解冻后内蒙古绒山羊精液质量的影响,通过检测精子活力、结构完整性、运动性能、抗氧化能力和线粒体功能,筛选出最佳的添加浓度。以期为谷氨酰胺、苯丙氨酸、亮氨酸在绒山羊精液冷冻保存中的应用提供理论依据和参考。主要获得以下研究结果:1.在冷冻保存稀释液中添加不同浓度（2、4、6、8 mmol/L）的谷氨酰胺,结果发现4 mmol/L谷氨酰胺对绒山羊精子冷冻-解冻后质量具有积极影响,冷冻-解冻后精子活力为67.9%、质膜完整率为54.5%、顶体完整率为79.2%、直线运动速度为49.6μm/s、平均路径速度为54.6μm/s,均显著高于对照组（P＜0.05）。在冷冻保存稀释液中添加不同浓度（0.01、0.1、1、10 mmol/L）的亮氨酸,结果发现1 mmol/L亮氨酸对绒山羊精子冷冻-解冻后质量具有积极影响,冷冻-解冻后平均路径速度为54.6μm/s、直线运动速度为58.7μm/s、曲线运动速度为93.7μm/s,均显著高于对照组（P＜0.05）。在冷冻保存稀释液中添加不同浓度（0.01、0.1、1、10 mmol/L）的苯丙氨酸,结果显示,在稀释液中添加10 mmol/L苯丙氨酸的精子冷冻-解冻后活力为48.4%、前向运动精子比例为24.4%、平均路径速度为29.7μm/s、直线运动速度为26.9μm/s、曲线运动速度为51.9μm/s,均显著低于对照组（P＜0.05）。因此,在冷冻保存稀释液中添加苯丙氨酸对绒山羊精子冷冻-解冻后质量没有积极影响,反而随着苯丙氨酸浓度的增加表现出负面作用。2.由于添加谷氨酰胺对冷冻-解冻后精子活力和结构完整性的保护作用,所以对冷冻-解冻后的精子的抗氧化指标进行检测,结果显示,4 mmol/L谷氨酰胺对绒山羊精子冷冻-解冻后的抗氧化指标具有积极影响,冷冻-解冻后总抗氧化能力为1.59mmol/L、CAT活性为374.93 U/mgprot、SOD活性为92.95 U/mgprot、GPx活性为1390.77 m U/mgprot,均显著高于对照组（P＜0.05）。冷冻-解冻后的ROS水平为603,MDA含量为18.2μmol/mgprot,显著低于对照组（P＜0.05）。所以,在冷冻保存稀释液中添加4 mmol/L谷氨酰胺可以减少精子在冷冻过程中受到的氧化应激,从而改善绒山羊精液冷冻保存效果。3.因为添加亮氨酸对冷冻-解冻后精子运动参数的正向影响,所以对冷冻-解冻后精子的能量代谢指标进行检测,结果发现1 mmol/L亮氨酸对绒山羊精子冷冻-解冻后能量代谢具有积极影响,ATP含量为0.42μmol/m L、线粒体膜电位为2.82ΔΨm、线粒体呼吸链复合体Ⅰ活性为197.32 U/mgprot、线粒体呼吸链复合体Ⅱ活性为109.26U/mgprot,均显著高与对照组（P＜0.05）。因此,在冷冻保存稀释液中添加1 mmol/L亮氨酸可以提高精子的能量代谢,进而改善绒山羊精液的冷冻保存效果。综上所述,本研究表明在内蒙古绒山羊精液冷冻稀释液中添加4 mmol/L的谷氨酰胺可以减少精子冷冻过程中的氧化应激,添加1 mmol/L的亮氨酸可以提高精子的能量代谢,从而改善绒山羊精液冷冻保存效果。