冠状病毒的感染谱极为广泛,包括人和多种动物。冠状病毒宿主的广泛性及基因组的结构特征使其在进化过程中极易发生变异,因此新亚型及新的冠状病毒不断出现。造成我国仔猪腹泻的冠状病毒主要包括猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和近年新发的猪δ冠状病毒（PDCoV）。2010年变异的PEDV在我国的爆发流行导致感染仔猪死亡率达到100%。2014年新发的PDCoV主要引起10日龄内的仔猪发病,仔猪感染PDC-o V后与TGEV和PEDV感染引起的的临床症状极其相似,均可以造成仔猪严重腹泻,呕吐等症状,给我国养猪业带来了极大威胁。本研究对河南省部分地区的仔猪腹泻冠状病毒（TGEV、PEDV和PDCoV）的感染情况进行了调查,对河南省部分地区PEDV毒株的主要结构基因进行了序列测定并且与国内外流行毒株基因进行了比对,分析其同源性及亲缘关系,同时将PDCoV毒株感染小鼠后,研究PDCoV对小鼠的致病性。本研究为河南省各猪场对仔猪腹泻冠状病毒病的防控提供依据,并为PDCoV致病机制的进一步研究奠定了基础。具体研究内容如下:1.根据Gen Bank中登录的PDCoV N基因（HKU15-155毒株,登录号:JQ065043.1）、PEDV M基因（JXNC13202毒株,登录号KJ526109.1）和TGEV N基因（H155毒株,登录号:GQ374566）设计并合成了三对引物,对河南省部分地区（2015年4月至2016年12月）的148份腹泻样品进行了病原检测,其中PEDV阳性样品54份,阳性率为36.5%;PDCoV阳性样品30份,阳性率19.6%;TGEV阳性样品3份,阳性率2%。通过对冠状病毒阳性病料采集的不同地点分析,PEDV在郑州中牟和安阳的阳性感染率最高,为100%,其次为商丘85.7%;PDCoV在来自于中牟和许昌的病料中其阳性率最高,为100%。在三门峡和中牟某猪场存在PDCoV与PEDV的交叉感染,在濮阳某猪场存在PEDV和TGEV的交叉感染,说明造成河南省仔猪腹泻的冠状病毒主要是PDCoV和PEDV。通过对阳性病料采集的时间分析,PEDV在温度较低的春季、冬季阳性率较高,PDCoV在四个季节均能检测到,在冬季阳性率最高,说明仔猪腹泻类冠状病毒在温度较低的春冬季较为多发。2.参照Gen Bank中登录的PEDV N、M和S基因设计并合成特异性引物,对河南省不同地区的PEDV毒株CH-KF-1株、CH-KF-2株、CH-SMX株、CH-PY株和CH-SQ株的M和N基因进行扩增,对CH-SMX、CH-LH株、CH-AY株和CH-PY株的S基因进行扩增,M基因841bp,N基因全长1417bp,S基因全长4164bp的目的片段。将该序列与国内外毒株序列进行比对,进行遗传进化分析。结果显示,由M基因同源性分析知,CH-KF-1株、CH-KF-2株、CH-SMX株和CH-SQ株与韩国和日本流行毒株同源性较高,为99.7%,说明这4株有可能来自韩国或日本。CH-PY株的M基因与泰国株同源性为99.9%,说明PY株可能来自泰国。由S基因同源性分析可知,CH-SMX株S基因与韩国株同源性最高为98.7%,与PEDV经典株CV777同源性最低为94.4%;并且S基因氨基酸突变主要位于S1区,该区域的突变可能是CV777疫苗株免疫保护力不佳的原因。3.相关研究推测PDCoV可能有广泛的宿主谱,本试验应用细胞适应性PDCoV CH-01株人工感染Balb/C小鼠,在感染后3天、5天和7天分别应用RT-PCR方法检测PDCoV在小鼠体内的动态分布情况并对其主要组织器官进行病理组织学分析。结果显示,感染后3天,在小鼠的肾脏和肠道检测到该病毒;在感染后5天可以在肺脏、肾脏和肠道检测到;在感染后7天在小鼠的肺脏和肠道检测到。病理切片结果显示,攻毒后小鼠肠绒毛部分或者完全萎缩和脱落,并且在肾脏与肺脏也产生不同程度的病变,与RT-PCR检测结果一致,说明PDCoV可以感染小鼠,并且有一定的致病性;