【摘 要】
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目的:铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）具有高致病力及耐药性,易定植于患者体中,难以清除,是一种常在临床上引起重症感染及院内感染的革兰阴性条件致病菌。PA的耐药机制复杂,涉及众多耐药基因异常以及某些基因的表达量变化等所致的药物敏感性降低。本课题对耐碳青霉烯类药物的PA进行菌株特征分析及耐药基因检测,同时了解PA在本地区的流行病学特征,为临床治疗提供指导。方法:本研究
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目的:铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）具有高致病力及耐药性,易定植于患者体中,难以清除,是一种常在临床上引起重症感染及院内感染的革兰阴性条件致病菌。PA的耐药机制复杂,涉及众多耐药基因异常以及某些基因的表达量变化等所致的药物敏感性降低。本课题对耐碳青霉烯类药物的PA进行菌株特征分析及耐药基因检测,同时了解PA在本地区的流行病学特征,为临床治疗提供指导。方法:本研究连续收集了2018.06至2019.05本院微生物室从不同病区的标本分离出的PA98株,所有菌株均通过全自动细菌分析仪进行菌种及药敏鉴定。该98株菌株应用微量肉汤稀释法测定亚胺培南（Imipenem,IPM）的最小抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration,MIC）值,共获得38株耐碳青霉烯类药物的菌株;进一步进行多粘菌素B（Polymyxin B,POLB）及头孢他啶-阿维巴坦（Ceftazidime-Avibactam,CAZ-AVI）MIC值鉴定;通过PCR方法检测耐药基因,对产物进行电泳及Sanger（双脱氧链终止法）测序;最后,运用荧光定量PCR方法对38株耐药菌株与29株全敏菌株Opr D基因的表达量差异进行分析。结果:98株铜绿假单胞菌主要分离自56岁至76岁之间的中老年患者,其中61岁至80岁之间的老年患者占比最大,共计51位（52.04%）。菌株分离大部分来源于痰液标本,共43份（43.88%）。常规抗菌药物药敏结果如下:阿莫西林/棒酸100.00%耐药,其余抗菌药物耐药率按耐药比例从低到高依次为丁胺卡那霉素1.43%,妥布霉素7.29%,庆大霉素8.31%,哌拉西林/他唑巴坦16.15%,头孢吡肟16.98%,左旋氧氟沙星17.95%,环丙沙星20.49%,头孢他啶23.68%,哌拉西林33.12%,美罗培南（Meropenem,MEM）36.61%,氨曲南37.11%。经IPM的微量肉汤稀释法药敏检测后获得38株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌（Imipenem-resistant pseudomonas aeruginosa,IRPA）,该38株耐药菌株中对POLB耐药的2株,中介的1株,共占7.89%,对CAZ-AVI耐药的13株,占34.21%,而对POLB、CAZ-AVI都耐药的共2株,占5.26%。耐药基因检测结果如下:检出Mex A耐药基因32株（84.21%）,Mex C耐药基因34株（89.47%）,Mex E耐药基因35株（92.11%）,38株耐药菌株均携带Mex X、Opr D、Amp C三个耐药基因。Sanger测序及比对结果未发现上述基因突变。38株耐药菌株中有26株Opr D基因的相对表达量减少,同时上述38株耐药菌株与29株全敏菌株Opr D基因的表达量存在统计学差异P<0.05。结论:本院分离的PA对碳青霉烯类药物具有较高的耐药性,但对POLB及CAZAVI这两种药物的耐药率仍然较低;临床分离的耐碳青霉烯类药物的PA携带以下耐药基因:Mex A、Mex C、Mex E、Mex X、Opr D、Amp C,我院耐碳青霉烯类药物PA的Opr D基因相对表达量减少,提示可能是PA耐碳青霉烯类药物的主要机制之一。本院碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌（Carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA）已经开始出现高度耐药性并且有流行的趋势,应予以重视。
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