目的:1.整理文献分析国医大师治疗大肠癌的中医诊疗经验,以期为现代中医治疗大肠癌提供更系统、更全面的治疗思路。2.在细胞和分子水平上,研究芪贞汤是否能通过调控AQP1及其下游PI3K/AKT/RAC1信号通路,从而抑制大肠癌细胞的增殖和转移,为芪贞汤应用于大肠癌的临床治疗提供实验依据。方法:1.通过查阅国医大师治疗大肠癌的相关文献,总结、归纳和分析国医大师对大肠癌的病因病机、辨证论治和用药特色,以加深对大肠癌现代中医临床治疗的认识。2.采用MTT法观察芪贞汤不同剂量对人大肠癌HCT-116和HT-29细胞增殖的影响,并测出芪贞汤对两种细胞的IC50值,并以IC50值为依据,拟定芪贞汤后续实验的药物浓度。3.采用划痕实验观察不同浓度芪贞汤对人大肠癌HCT-116和HT-29细胞迁移能力的影响,并计算出芪贞汤对两种细胞迁移的抑制率。4.采用RT-PCR检测AQP1及其下游PI3K/AKT/RAC1信号通路的mRNA表达情况,并计算其相对表达量。5.采用Western Blot检测AQP1及其下游PI3K/AKT/RAC1信号通路的蛋白表达情况,并计算其相对表达量。结果:1.整理本论文选取的国医大师治疗大肠癌的文献发现,正气亏虚是大肠癌发生的前提,癌毒内生是大肠癌发展的关键,临床多见脾气亏虚、气血不足、肝肾阴虚、湿热蕴毒、气滞血瘀等证型,在治疗时以扶正益气为治本之法,清热解毒、活血化瘀等为治标之法,常用扶正药和抗癌解毒药。2.MTT实验结果显示,不同浓度芪贞汤对HCT-116和HT-29细胞均有一定的抑制作用,抑制作用呈浓度依赖性。其中,HCT-116细胞24h、48h和72h的IC50为1576.841μg/ml、1011.479μg/ml和555.611μg/ml;HT-29细胞48h和72h的IC50为1475.79μg/ml和549.523μg/ml。根据IC50值和课题组实验经验,两种细胞皆选取48h为后续实验时间,其中,芪贞汤干预HCT-116细胞的低、中、高浓度分别为250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml;芪贞汤干预HT-29细胞的低、中、高浓度分别为350μg/ml、700μg/ml、1400μg/ml。3.划痕实验结果显示,芪贞汤干预人大肠癌HCT-116和HT-29细胞48h后,与空白对照组相比,不同浓度芪贞汤均能有效抑制两种细胞迁移,其划痕愈合率均有显著性差异（P＜0.01）,抑制作用呈浓度依赖性;Bacopaside II能明显抑制两种细胞的迁移速度,统计学有极显著性差异（P＜0.01）。4.RT-PCR实验结果显示,芪贞汤干预人大肠癌HCT-116和HT-29细胞48h后,在HCT-116细胞中,与空白对照组相比,AQP1、AKT和RAC1的mRNA表达水平,芪贞汤高、中、低浓度组和Bacopaside II组的表达均下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）。在HT-29细胞中,与空白对照组相比,（1）AQP1的mRNA表达水平,芪贞汤高、低浓度组的表达上调,统计学有极显著差异（P＜0.01）;芪贞汤中浓度组和Bacopaside II组的表达上调,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）AKT的mRNA表达水平,芪贞汤高、低浓度组的表达上调,差异有统计学意义（P＜0.05）;芪贞汤中浓度组和Bacopaside II组的表达上调,统计学有极显著差异（P＜0.01）。（3）RAC1的mRNA表达水平,芪贞汤高、中、低浓度组和Bacopaside II组的表达均下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）。但都不具有浓度依赖性。5.Western blot实验结果显示,芪贞汤干预人大肠癌HCT-116和HT-29细胞48h后,在HCT-116细胞中,与空白对照组相比,（1）AQP1的蛋白表达水平,芪贞汤高、中、低浓度组和Bacopaside II组的表达下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）AKT的蛋白表达水平,芪贞汤高、中、低浓度组的表达下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）;Bacopaside II组的表达轻微下调,差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）P-AKT的蛋白表达水平,芪贞汤高、中、低浓度组和Bacopaside II组的表达下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）。（4）RAC1的蛋白表达水平,芪贞汤高浓度组的表达下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）;芪贞汤中、低浓度组的表达下调,差异有统计学意义（P＜0.05）;Bacopaside II组的表达轻微下调,差异无统计学意义（P＞0.05）。在HT-29细胞中,与空白对照组相比,（1）AQP1的蛋白表达水平,芪贞汤高、中浓度组和Bacopaside II组的表达下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）;芪贞汤低浓度组的表达下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）AKT的蛋白表达水平,芪贞汤高、低浓度组和Bacopaside II组的表达下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）;芪贞汤中浓度组的表达下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）P-AKT的蛋白表达水平,芪贞汤高、中浓度组和Bacopaside II组的表达下调,差异有统计学意义（P＜0.05）;芪贞汤低浓度组的表达明显下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）。（4）RAC1的蛋白表达水平,芪贞汤高浓度组和Bacopaside II组的表达下调,统计学有极显著差异（P＜0.01）;芪贞汤中、低浓度组的表达下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。但都不具有浓度依赖性。结论:1.大肠癌的病因病机以正气亏虚为主,内生湿、热、瘀、毒等病理产物,证型多见脾气亏虚、气血不足、癌毒瘀滞等,因此治法以扶正益气为主,并用清热解毒、活血化瘀等治标之法,多用扶正药、抗癌解毒药、活血化瘀药等遣方用药。2.具有扶正益气、活血化瘀、清热解毒作用的芪贞汤能显著抑制人大肠癌细胞HCT-116和HT-29的增殖迁移能力,且呈浓度依赖性。3.芪贞汤抗大肠癌细胞转移的机制,可能与调控AQP1及下游PI3K/AKT/RAC1通路的基因和蛋白表达有关。