禽流感是对家禽业和公共卫生危害严重的传染病,其病原禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）血清亚型众多,近年来,在我国家禽中流行的主要有H5N6、H7N9和H9N2亚型AIV。根据AIV对家禽的致病性差异,可将其分为高致病性和低致病性毒株,研究表明大部分的H9N2亚型AIV都属于低致病性毒株。在多数情况下只引起家禽轻微的呼吸道症状和产蛋下降,但若与其他细菌混合或协同继发感染则导致造成较严重的死亡,带来较大的经济损失。采用H9N2禽流感灭活疫苗免疫接种是预防该病流行最有效的方法,然而,由于AIV容易产生变异的特性,临床上禽群免疫后带毒排毒的现象时有发生,因此,研究H9N2流行毒株的变异特点,筛选有良好抗原匹配度的疫苗候选株制备新型的灭活疫苗对有效防控该病具有重要意义。本研究采集来自广东江门地区鸡群的血清,通过HA-HI试验检测HI抗体评价当前H9N2亚型AIV灭活疫苗的免疫效果,结果表明,区域内肉鸡群在经过2次疫苗免疫后,56%群体可以达到9log2以上抗体水平,其余44%鸡群抗体水平也都在7～9log2之间。运用SPSS18.0软件对鸡群抗体离散度、抗体水平和日龄之间的相关性统计分析发现,抗体离散度与抗体水平显著负相关,相关系数为-0.562;抗体离散度则与日龄弱相关,相关系数为-0.257;日龄与抗体水平也呈现比较强的显著正相关,相关系数为0.443。而种鸡群的抗体水平显著高于肉鸡群,64.3%的产蛋种鸡群抗体水平都能够达到10log2以上,28.6%在9～10log2之间。同时,本研究采集该地区鸡群的咽肛棉拭子,通过接种鸡胚分离到两株H9N2亚型AIV（JM1株和JM3株）,并克隆其HA基因进行遗传进化分析,两株病毒的HA基因序列均1683 bp,编码560个氨基酸。与chicken/Yunnan/YNKM/2015（H9N2）分离株的核苷酸和氨基酸的同源性最高,分别为97.5%～98%和98.0%～98.7%;与经典疫苗毒株SS株、F98株的同源性分别为88.6%～89%和88.4%～89%。HA基因的裂解位点附近氨基酸序列均为PSRSSR/GL,附近均无多个连续的碱性氨基酸插入,具有典型的LPAIV的HA基因特性。病毒在218～220位缺失了一个糖基化位点,提示毒株有致病性增强的趋势。遗传进化树分析表明两个毒株均属于CK/Beijing-like分支的Y280小分支（H9.2.5亚分支）,与A/Duck/Hong Kong/Y280/97的亲缘关系较近,与A/Quail/Hong Kong/G1/9（H9.4.1分支）及国内疫苗株亲缘关系较远。在实验室条件下,选用JM3株作为疫苗候选种毒制备禽流感H9N2病毒灭活疫苗。收获的鸡胚病毒液HA滴度均在1:512以上,疫苗的物理性状检验、无菌检验、安全检验均符合拟定标准的要求;将疫苗免疫试验鸡,21d后测定其HI抗体,同时分别用JM3株（H9N2）和流行毒株SD株（H9N2）进行攻毒保护试验,攻毒结果为100%保护,表明JM3株具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选毒株。