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背景腺病毒（AdV）属于自然界普遍存在的病原体,通常会引起轻度的呼吸道,消化道和眼部感染,也会引起肝炎,结肠炎,脑膜炎,膀胱炎等多种临床综合征。其感染高峰主要发生在春季和冬季,传播途径主要为空气传播和直接接触传播。病毒潜伏期为5～12天,但通常感染期可持续数周至数月,目前还没有可用于大规模使用的疫苗,主要感染人群为婴幼儿和免疫力缺陷者,包括艾滋病病毒携带者和受器官移植者。腺病毒载体是将外源基因导入宿主细胞的最有效的工具之一,与慢病毒和逆转录病毒等相比,腺病毒载体的优势明显。目前腺病毒载体主要用于艾滋病病毒（HIV）、流感病毒、埃博拉病毒（Ebola virus）和新型冠状病毒（COVID-19）等的疫苗研究,最常用的是人腺病毒5型（Ad5）载体,但人体内预先存在的Ad5中和抗体却给这些研究带来了局限性。根据相关报道,世界大多数人口对Ad5都有既存的免疫力,即血清中含有较高滴度的中和抗体,这严重降低了以Ad5为载体腺病毒相关疫苗的临床效果。因而,研究发现可用于替代Ad5载体的新型腺病毒载体对于我国腺病毒载体疫苗的发展具有重要意义。目前,猴腺病毒23型（SAd23）和人腺病毒49型（Ad49）载体越来越受到研究者的关注,本实验室前期已经构建了 Ad49L和猴Sad23L两种腺病毒载体,以及带有荧光基团的Ad49L-eGFP和Sad23L-eGFP两种新型重组腺病毒,且已证明其均具有较高的毒性和免疫性。但关于以上两种腺病毒在中国人群血清中的中和抗体水平还未有人提及,这将不利于尽早产生以Ad49L或Sad23L为载体的疫苗。目的本研究拟通过检测中国华南、东北、华中、西南和西北各地区（广州、哈尔滨、宜昌、成都和西安）献血者血清中的Ad49和SAd23的中和抗体水平,并与Ad5检测结果进行对比,了解中国各个地区人群的Ad49和SAd23感染状况及中和抗体滴度分布情况,为Ad49L和Sad23L作为候选疫苗载体提供流行病学信息。本研究拟通过分析广州、哈尔滨、宜昌、成都和西安地区的Ad5、Ad49、SAd23血清阳性率和血清阳性样本中和抗体滴度在不同性别、不同年龄以及不同职业间是否存在差异,分析Ad5、Ad49、SAd23感染状况是否与性别、年龄和职业相关联,进一步完善中国Ad5、Ad49和SAd23感染的流行病学研究,为Ad5、Ad49和SAd23的感染防控研究提供数据。本研究拟通过分析广州、哈尔滨、宜昌、成都和西安地区的Ad5、Ad49、SAd23血清中和抗体阳性样本之间是否存在交叉反应,为Ad49L和Sad23L载体的进一步研究提供支持。方法使用氯化铯离心法纯化Ad5-eGFP,Ad49L-eGFP和Sad23L-eGFP,使用TCID50法检测三种新型重组腺病毒的病毒滴度,并确立各个病毒的感染用量及感染时间。利用基于全自动细胞成像多功能微孔板检测仪的报告基因检测法检测献血者血清中的Ad5、Ad49和SAd23的中和抗体水平。结果利用基于全自动细胞成像多功能微孔板检测仪的报告基因检测法共检测了包括广州,哈尔滨,宜昌,成都,西安在内的5个地区共500份健康献血者的样本,其血清阳性率分别为Ad5:广州91%,哈尔滨73%,宜昌80%,成都69%,西安70%。Ad49:广州4%,哈尔滨5%,宜昌1%,成都1%,西安1%。SAd23:广州11%,哈尔滨10%,宜昌20%,成都6%,西安10%。五个地区的Ad5血清阳性率显著高于Ad49和SAd23（Pearson chi-square,P＜0.001）,且宜昌和西安地区的SAd23的血清阳性率也显著高于Ad49（Pearson chi-square,P＜0.01）。另外发现,同一腺病毒在不同地区的血清阳性率也有差异,广州地区的Ad5血清阳性率最高,达到了 91%,明显高于其他地区（Pearson chi-square,P＜0.05）。宜昌地区的SAd23血清阳性率也高于哈尔滨、成都和西安地区（Pearson chi-square,P＜0.05）。宜昌地区的Ad5血清阳性率女性高于男性（Pearson chi-square,P=0.045）,西安地区的Ad5血清阳性样品中和抗体滴度女性也高于男性（Mann-Whitney,P=0.03）。哈尔滨、成都和西安地区的Ad5血清阳性伴随年龄变化表现出显著差异（Cochran-Armitage,P=0.004,P=0.008,P=0.005）。SAd23血清阳性率伴随年龄变化表现出显著差异（Cochran-Armitage,P=0.037）,哈尔滨地区阳性样本的中和抗体滴度伴随着年龄变化表现出显著差异（Jonkheere-Terpstra P=0.009）。不同职业组的调查发现学生组的Ad5血清阳性率相比于农民组和医务工作者组较低（Pearson chi-square,P=0.02,P=0.03）,血清阳性样品中和抗体滴度农民组低于工人组和医务工作者组（Mann-Whitney,P=0.024,P=0.033）,Ad49由于阳性样本较少,在不同性别组、不同年龄组和不同职业组之间的阳性率和血清阳性样品中和抗体滴度水平均无显著差异。在交叉反应分析中发现,在SAd23中和抗体阳性和阴性的血清样本中,Ad5的血清阳行率表现出明显差异（Pearson chi-square,P=0.001）,但在其血清阳性样品中和抗体滴度水平间无显著差异。结论1.本研究构建了 一种基于全自动细胞成像多功能微孔板检测仪的更加简单,方便和快速的用于血清腺病毒中和抗体检测的方法。2.广州,哈尔滨,宜昌,成都,西安献血者中的Ad5中和抗体阳性率及其滴度普遍较高,这将降低Ad5载体疫苗的临床使用效果,Ad49和SAd23的中和抗体阳性率及其滴度均较低,Ad49L和Sad23L可作为候选的腺病毒疫苗载体进行深入研究。3.性别、年龄和职业暴露会影响Ad5的感染状况,且Ad5和SAd23中和抗体之间可能存在交叉反应。