【摘 要】
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禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)是禽类发生大肠杆菌病的病原体。APEC血清型众多,无交叉保护性,往往造成混合感染,防治困难。近年来,因抗生素的滥用导致多重耐药菌株的出现,阻碍禽大肠杆菌病的防控,制约畜禽产业经济发展,威胁人类公共卫生安全。因此本研究对安徽部分地区APEC进行了致病性和耐药性的研究,有助于了解安徽地区APEC的致病机制及
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禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)是禽类发生大肠杆菌病的病原体。APEC血清型众多,无交叉保护性,往往造成混合感染,防治困难。近年来,因抗生素的滥用导致多重耐药菌株的出现,阻碍禽大肠杆菌病的防控,制约畜禽产业经济发展,威胁人类公共卫生安全。因此本研究对安徽部分地区APEC进行了致病性和耐药性的研究,有助于了解安徽地区APEC的致病机制及耐药情况,为安徽地区APEC的防治提供了用药参考,对保护人类的公共卫生安全具有重要意义。本研究从安徽省部分地区的病料中分离鉴定出92株APEC分离株,首先进行种系发生分型的测定、14种毒力基因的检测和动物致病性试验;然后进行12种耐药基因的检测和药物敏感实验,把握APEC毒力基因和耐药基因的发展分布趋势,给安徽地区APEC的防治提供参考。具体研究内容和结果如下:1、安徽部分地区APEC的分离鉴定本研究分离的APEC来自合肥肥东、肥西、淮北市、淮南市寿县、六安市舒城县、蚌埠市怀远县等安徽地区的送检病禽。首先无菌采集新鲜肝脏和肺脏接种于LB固体培养基,使用伊红美蓝(EMB)固体培养基分离培养,经革兰氏染色镜检和生化试验鉴定后,利用pho A基因的引物进行PCR鉴定,共分离鉴定出92株大肠杆菌。利用chu A、yja A、Tsp E4.C2的特异性引物,对92株分离菌株使用PCR技术进行种系发生分型的测定,结果发现分离菌株中属于A群的19株(占20.65%),属于B1群的有35株(占38.04%),属于B2群的有20株(占21.74%)、属于D群的有18株(占19.57%)2、安徽部分地区APEC致病性研究根据毒力基因的分类选取14种毒力基因,使用特异性引物,对92株分离菌株采用PCR技术进行毒力基因的检测,结果表明,fim C、iuc D、iut A、omp A、mat、iss、tra T、ibe B、yij P、iro N这10种毒力基因的阳性率超过50%,其中omp A检出率最高为98.91%,其次mat检出率95.65%,fim C检出率为91.30%,14种毒力基因全部被检出,每株菌可携带3-14种毒力基因;选取携带毒力基因数量最多5株分离菌(A2、A46、A65、A68、A80)进行动物致病性试验,试验动物为7日龄白羽鸡,分为6组1-5组分别注射上述5株菌的菌液,6组为对照组,注射等剂量的PBS,依据鸡只的死亡情况和剖检的病理变化得到A2、A68、A80属于高致病菌株,A46、A65属于低致病菌株。3、安徽部分地区APEC耐药性研究根据药物的种类选取12种常用抗菌药物,采用纸片琼脂扩散法(K-B法)对92株分离菌株进行药物敏感性检测,结果表明,92株APEC对氟苯尼考(氯霉素类)、磺胺异噁唑(磺胺类)和四环素(四环素类)全部耐药,88株菌株(占91.30%)对头孢他啶(青霉素类)敏感,所有菌株对14种抗菌药呈现不同程度的耐药,多重耐药严重;对92株分离菌株采用PCR技术进行12种耐药基因的检测,青霉素类耐药基因bla TEM、bla CTXM,粘菌素类耐药基因mcr和喹诺酮类耐药基因gyr B检出率在90%以上,β-内酰胺类耐药基因qnr A检出率最低为4.35%,12种耐药基因全部被检出。综上所述,本研究在安徽部分地区分离鉴定的92株APEC中,B1群为主要优势分群,fim C、omp A、mat这3种毒力基因的携带率高。四环素、磺胺异噁唑和氟苯尼考耐药情况严重,多重耐药现象普遍;gyr B、mcr、bla TEM、bla CTXM这4种耐药基因的携带率高。
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