【摘 要】
：
目的:探讨生骨再造丸通过磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/AKT/mTOR）通路对激素性股骨头坏死（Steroid-induced avascularnecrosi-s of femoral head,SANFH）兔BMSCs成骨分化的干预作用。方法:将12只新西兰大白兔按随机数字表法分为空白血清组（4只）和含药血清组（8只）,培养1周后提取血清,用CCK8法检测出
论文部分内容阅读
目的:探讨生骨再造丸通过磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/AKT/mTOR）通路对激素性股骨头坏死（Steroid-induced avascularnecrosi-s of femoral head,SANFH）兔BMSCs成骨分化的干预作用。方法:将12只新西兰大白兔按随机数字表法分为空白血清组（4只）和含药血清组（8只）,培养1周后提取血清,用CCK8法检测出血清干预下细胞生长数最佳浓度及时间,随后将课题组前期实验提取冻存的空白兔及SANFH模型兔BMSCs复苏,向SANFH兔BMSCs中依次加入生骨再造丸血清、PI3K通路激动剂、PI3K通路抑制剂,分别记为空白组、模型组、模型+药物组、模型+激动剂组（兔SANFH BMSCs+740-YP）、模型+抑制剂组（兔SANFH BMSCs+LY294002）。成骨诱导后茜素红染色测定各组BMSCs中钙盐沉积,确定其成骨分化情况;q RT-PCR检测各组BMSCs中PI3K、AKT、mTOR的m RNA水平;Western Blot法检测各组BMSCs中PI3K、AKT、mTO R、p-mTOR的蛋白表达;ELISA法检测各组BMSCs中BMP-2、TGF-β、EGF的表达水平;ALP（碱性磷酸酶）法检测各组细胞成骨分化活性。结果:（1）前期实验兔Micro-CT表现:空白组兔股骨头内骨小梁排列整齐,骨结构稳定,空洞较少;造模组兔股骨头骨小梁变细断裂,结构稀疏,空洞增多。（2）复苏后BMSCs形态学观察:各组细胞表现为梭形或近梭形,呈团簇性或放射性分布,紧密贴壁,各组形态及贴壁无显著差异。（3）血清干预培养BMSCs情况:空白组血清干预BMSCs不同梯次浓度不同时间下细胞活性总体呈略微下降趋势,在10%浓度/48h干预条件下细胞活性最高,相同浓度相同时间下含药血清对比空白血清细胞活性都有升高。（4）BMSCs的成骨分化情况:成骨诱导后采用茜素红染色,空白组BMSCs中钙盐沉积结节数量较多,分布均匀;模型组中钙盐沉积结节大幅度减少,分布不均匀;模型+药物组BMSCs中钙盐沉积结节数量介于空白组与模型组之间,散在分布,相比空白组不均匀;模型+激动剂组钙盐沉积结节数量接近药物组,大小分布也略有不均;模型+抑制剂组钙盐沉积结节数量相比其他组最少,零星分布。（5）q RT-PCR法检测结果:模型组中PI3K、AKT、mTOR的表达水平均低于空白组BMSCs,差异具有统计学意义（P＜0.01）,模型+药物组中PI3K、AKT、mTOR表达水平相比模型组均有上调,差异具有统计学意义（P＜0.01）,模型组中的PI3K对比模型+激动剂组水平较低,对比模型+抑制剂组表达较高（P＜0.01）,模型组中的AKT、mTOR表达水平对比模型+激动剂组降低（P＜0.01）,对比模型+抑制剂组均有升高（P＜0.05）。（6）Western Blot法检测结果:模型组中PI3K、AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达均低于空白组,差异具有统计学意义（P＜0.01）,生骨再造丸血清干预后的药物组PI3K、AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平较模型组有显著上调,具有统计学差异（P＜0.01）,模型组中PI3K表达相比激动剂组有一定下降（P＜0.05）,对比抑制剂组无统计学意义（P＞0.05）,模型组中AKT表达相比模型+激动剂和模型+抑制剂组均有显著差异（P＜0.01）,模型组中mTOR表达相比模型+激动剂较低（P＜0.01）,对比模型+抑制剂组无统计学意义（P＞0.05）,模型组中p-mTOR表达相比模型+激动剂组明显降低（P＜0.01）,对比模型+抑制剂组有一定差异（P＜0.05）。（7）ELISA法检测结果:模型组中BMP-2、TGF-β、EGF水平对比空白组均有上升,对比模型+药物组水平明显下降,均具有统计学差异（P＜0.01）。（8）ALP活性检测结果:模型组ALP活性相比空白组明显降低,模型+药物组对比模型组有显著提高,均具有统计学意义（P＜0.01）,模型+激动剂组对比模型组有明显上升（P＜0.01）,模型+抑制剂组对比模型组有一定降低（P＜0.05）。结论:（1）生骨再造丸能够对BMSCs生长增殖产生促进作用。（2）通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路,能够促进BMSCs成骨分化是治疗SANFH的主要机制之一。（3）生骨再造丸靶向调控PI3K/AKT/mTOR信号通路的传导,可能是治疗SANFH的主要机制之一。
其他文献
目的:针对2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）核心病机“中满内热”,探讨清热通腑代表方大黄黄连泻心汤通过调节自噬干预T2DM模型INS-1细胞的作用及影响,经网络药理学及分子对接分析大黄黄连泻心汤的有效成分及作用靶点,借助非靶向代谢组学进一步验证大黄黄连泻心汤含药血清作用的相关成分和靶点,为明确本方治疗T2DM提供实验依据。方法:1网络药理学及分子对接分析大黄黄
目的:观测舒肝和络醒脾方（Shugan Heluo Xingpi Decoction,SHXD）对CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠的治疗作用,并基于Wnt/β-Catenin信号通路探讨其作用机制。方法:将60只雄性SPF级Wistar大鼠随机分为空白对照组（Blank group）、模型组（Model group）、阳性对照组（Positive control group）、舒肝和络醒脾方高、中、
目的:1.以国家知识基础设施数据库（China National Knowledge Infrastructure,CN KI）、中国医学生物文献数据库（China Biology Medicine Database,CBM）、中国学术期刊数据库（China Science Periodical Database,CSPD）及中文科技期刊数据库（Chi nese Citation Database
目的:总结敦煌医学疗痹类方的临床应用规律。丰富中医理论,充实治疗痹病的方药,为中医药治疗痹病提供更为有用的治法及方药。方法:以国际敦煌项目原卷子图片为主,筛选敦煌医学疗痹类方的条文医方,参考《中国出土古医书考释与研究》、《敦煌医药文献辑较》、《敦煌医药文献真迹释录》、《敦煌医粹—敦煌遗书医药文选校释》、《敦煌中医药精萃发微》、《敦煌中医药全书》、《敦煌古医方研究》、《实用敦煌医学》等书,校录所选的
目的观察半夏泻心汤及其不同配伍药组对抗生素诱导的肠道菌群失调幼鼠肠道菌群多样性的调整作用及结肠黏膜免疫屏障损伤的保护作用及机制。进一步根据中医“以方测证”理论,比较半夏泻心汤及其不同配伍药组的干预效应差异,探讨抗生素诱导的肠道菌群失调幼鼠结肠黏膜免疫屏障受损的中医证候特征,以期为临床开展中医药防治抗生素相关性胃肠道疾病提供思路及组方策略。方法选取3～4周龄健康SPF级雄性Balb/c幼鼠70只,随
目的:通过网络药理学寻找黄芪汤作用于放射性脑损伤的关键通路和核心靶点;通过体内实验观察黄芪汤对重离子辐射脑损伤模型鼠下丘脑-垂体轴TLR4/My D88/NF-κB信号通路关键分子和mi RNA的表达变化,从益气生津角度探讨黄芪汤干预放射性脑损伤的可能分子机制。方法:1网络药理学:采用TCMSP、BATMAN-TCM数据库及文献筛选出黄芪汤的有效成分及作用靶点,利用Uniport数据库对相应靶点蛋
目的基于异病同治理论探讨芪明颗粒对MCD大鼠模型眼、肾损害的保护作用及机制研究,为MCD的防治提供新的思路。方法1.采用计票策略对DR相关mi RNAs表达谱进行循证医学研究。检索了国内外八个数据库所有的中英文文献,运用NOS量表、MIAME指南和MIQE指南进行文献质量评价,利用规定的表格对纳入的文献进行数据提取,最后基于计票策略进行mi RNAs表达谱的总结和分析。2.选择SPF级健康SD雄性
目的:基于“神经血管耦合机制”,利用功能近红外光谱成像技术（f NIRs）检测评估失眠大鼠关键脑区血氧代谢和神经功能改变;进一步揭示和探讨“疏肝调神”针法对失眠大鼠模型关键脑区异常激活特征和功能重构的影响,初步阐明针刺干预失眠的脑功能调节机制,为针刺干预失眠的效应机制和应用研究提供依据。方法:SPF级2～3月龄健康雄性Wistar大鼠60只,适应性饲养7天,随机分为空白组10只、造模组50只。造模
该文通过查阅相关文献，总结药膳的历史沿革，结合阐释不同地区饮食习惯所促成的不同特色药膳，说明药膳的出现、演变与时代需求、地理环境等因素相关，进一步分析目前药膳现状，分析造成药膳现状的原因，针对药膳的被认知程度、制作工艺、相关标准等问题提出一些可行性的解决方案及相关建议，为药膳在新时期的发展提供新的思路和方向。
目的基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨大黄牡丹汤对AP肝损伤大鼠的干预作用及机制研究,为该复方临床应用提供实验支撑。方法1.（1）查阅近5年中医药治疗AP相关文献,分别从中医内、外疗法以及联合疗法方面进行归纳分析,对中医药治疗AP的临床研究进行综述,以期总结经验,为临床治疗提供参考。（2）通过计算机检索Pubmed、Cochrane Library、Web of Science、Emba