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目的:在维吾尔医学中,护肝布祖热颗粒(HBG)是护肝的经典方剂之一。然而,它在免疫性肝损伤中的作用尚不清楚。本研究将评估HBG对刀豆蛋白A(Con A)诱导的免疫性肝损伤的影响,并探讨其保护机制。方法:BALB/C小鼠随机分为5组(每组24只):Control组、Con A组、1.6 g/kg HBG+Con A组、3.2 g/kg HBG+Con A组、6 mg/kg泼尼松龙+Con A组。在Con A(20 mg/kg)注射前,给药组给予HBG和泼尼松龙每日灌胃1次,连续10天。于造模后2h,4h,6h取出小鼠肝脏和血清;生化试剂盒测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)和小鼠肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;苏木精-伊红(H&E)染色用于观察肝脏病理学变化,DCFH-DA探针用于检测活性氧(ROS)水平,TUNEL染色用于观察肝脏细胞凋亡状况。此外,通过qPCR评估肝脏Il1β、Tnfα、Ifnγ、Il17a、Il4、Tgfβ、Il6和Ifnβm RNA水平;免疫组织化学法检测小鼠肝脏内T-bet、GATA3、Foxp3、p-STAT1、p-STAT3、IRF1和p-JNK蛋白的表达;Western blot检测小鼠肝脏内JAK1、p-JAK1、ROR-γt、p-ERK1/2、p-p38、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、pAKT、Ras、BAD、p-BAD、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase9和Cleavedcaspase3蛋白的表达。为进一步探究HBG治疗免疫性肝损伤的作用机制,采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(LC-ESI-QTOF/MS)技术分析HBG中的成分,并结合网络药理学方法以及实验验证进一步验证HBG治疗免疫性肝损伤的作用机制以及发挥药效的主要成分。结果:H&E染色结果显示,Control组小鼠肝脏正常,肝细胞形态正常,排列有序,无破碎,无炎性细胞浸润。Con A组小鼠肝脏出现水肿并有大量肝细胞死亡和肝脏结构损伤。与Con A组相比,HBG的治疗使肝脏细胞的水肿现象和结构损伤得到明显改善,肝细胞死亡现象减少;与Control组相比,Con A组血清ALT、AST和TBIL水平均显著升高(p<0.01)。然而,HBG的治疗逆转了ALT、AST和TBIL水平的增加;与Control组相比,Con A组小鼠肝脏组织中MDA含量显著升高(p<0.01),SOD含量显著降低(p<0.01),HBG各给药组小鼠肝脏组织中MDA含量均显著降低(p<0.01),而SOD含量显著升高;ROS染色结果表明,与Control组相比,Con A组肝脏内ROS水平明显升高。HBG治疗组小鼠肝脏内ROS水平较Con A组而言得到了显著降低;TUNEL染色显示,与Control组相比,Con A组肝细胞TUNEL阳性细胞数较多,在给予HBG治疗后,凋亡细胞相较于Con A组而言有着显著减少;与Con A组相比,HBG显著下调小鼠肝脏组织中Il1β、Tnfα、Ifnγ和IL17a的m RNA表达水平,上调Il4、Tgfβ的m RNA表达水平(p<0.05或p<0.01);HBG下调小鼠肝脏内转录因子T-bet和ROR-γt的表达,上调GATA3和Foxp3的表达(p<0.05或p<0.01);与Con A组相比,护肝布祖热颗下调肝脏内Il6和Ifnβ的表达,并下调由Il6和Ifnβ介导的小鼠肝脏p-JAK1、p-STAT1、p-STAT3、IRF1、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38的表达(p<0.05或p<0.01);高分辨液质联用方法分析出HBG中含有香叶木素、槲皮素、木犀草素、山奈酚、芹菜素、异槲皮苷、秦皮甲素、秦皮乙素、芹黄素葡糖苷、柠檬酸、香草醛、东莨菪素、紫云英苷、木犀草苷、绿原酸等成分。网络药理学分析出香叶木素、秦皮甲素、紫云英苷和木犀草苷为发挥药效的关键成分,HRAS、EGFR、AKT1和PIK3R1为关键靶点。Western blot结果显示HBG上调小鼠肝脏内p-EGFR的表达,并上调由EGFR介导的Ras、p-PI3K、p-AKT的表达(p<0.05或p<0.01);此外,与Con A组相比,护肝布祖热显著下调凋亡相关蛋白Bax、Cleaved-caspase9、Cleaved-caspase3的表达,上调抗凋亡相关蛋白p-BAD和Bcl-2的表达(p<0.05或p<0.01)。结论:1、HBG对Con A诱导的小鼠免疫性肝损伤有一定的保护作用;2、HBG通过调节免疫细胞失衡治疗免疫性肝损伤小鼠;3、HBG的保护作用包括抑制IL-6和IFN-β诱导的JAK/STATs/IRF1信号通路,从而减少JNK激活引起的细胞凋亡。4、HBG发挥药效的主要成分为香叶木素、秦皮甲素、紫云英苷和木犀草苷,其治疗免疫性肝损伤的作用机制为通过激活EGFR/RAS/PI3K/AKT信号通路,抑制由BAD介导的线粒体内源性凋亡。本研究明确了传统维药复方HBG对免疫性肝损伤的药效,从动物实验验证和分子水平初步阐释了HBG治疗免疫性肝损伤的作用机制并初步阐明了HBG的物质基础,为其临床应用提供科学依据。