【摘 要】
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目的:探讨和枢消积丸通过调节AsTP3（三氧化二砷反式激活蛋白3,Arsenic-transactivated protein 3）对人肝癌细胞系增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响。方法:采用体外培养SMMC-7721肝癌细胞,通过CCK8实检测出和枢消积丸最适药物作用浓度,CCK8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖,细胞划痕、Transwell小室检测人肝癌细胞系SMMC-7721侵袭、迁移能力,流式
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目的:探讨和枢消积丸通过调节AsTP3（三氧化二砷反式激活蛋白3,Arsenic-transactivated protein 3）对人肝癌细胞系增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响。方法:采用体外培养SMMC-7721肝癌细胞,通过CCK8实检测出和枢消积丸最适药物作用浓度,CCK8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖,细胞划痕、Transwell小室检测人肝癌细胞系SMMC-7721侵袭、迁移能力,流式细胞术测细胞凋亡,q RT-PCR检测AsTP3 m RNA水平,Western blot检测细胞中AsTP3、P-AKT、P-GSK-3β、P-mTOR、BCL2及BAX蛋白表达水平。结果:1.和枢消积丸对肝癌细胞细胞增殖、凋亡的影响:（1）CCK8实验:与对照组0ug/ml相比,当药物浓度为18ug/ml时,与对照组相比,P*＜0.05,差异具有统计学意义,故选用18ug/ml为本实验的最佳药物浓度,并选用最佳药物浓度的1/2倍及1/4设置中剂量及低剂量组,予以和枢消积丸分别干预SMMC-7721细胞24小时、48小时、72小时,与对照组相比,和枢消积丸可以显著降低细胞活力;（2）平板克隆形成实验:平板克隆形成实验显示,随着药物浓度增加,细胞形成的集落显著减少;（3）流式细胞学检测:与对照组相比,随着药物浓度增加,细胞凋亡率明显增加;Western-blot实验显示和枢消积丸能够使抗凋亡蛋白BCL2的蛋白水平下降,同时还能使促凋亡蛋白BAX蛋白水平表达上升。2.和枢消积丸对肝癌细胞侵袭、迁移的影响:（1）Transwell实验:与对照组相比,和枢消积丸干预细胞24小时后,均能抑制细胞的侵袭及迁移能力,且呈剂量依赖性;（2）细胞划痕实验:与实验空白对照（0ug/ml）组相比,和枢消积丸干预细胞24小时后,随着药物浓度增加,划痕愈合能力逐渐降低,其中,高剂量组与对照组相比,具有显著差异;3.和枢消积丸对AsTP3及AKT/GSK-3β/m TOR信号通路的影响:（1）q RT-PCR实验:与对照组相比,药物浓度与AsTP3 m RNA水平呈负相关,其中仅高剂量组具有统计学意义;（2）Western-blot实验:和枢消积丸均能下调AsTP3、P-AKT、P-GSK-3β、P-m TOR的蛋白表达水平。结论:1.与对照组比,和枢消积丸能抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及克隆能力,促进肝癌细胞凋亡;2.和枢消积丸能下调AsTP3、P-AKT、P-GSK-3β、P-m TOR、BCL2的m RNA表达及蛋白水平并上调BAX蛋白的表达;3.和枢消积丸可能下调AsTP3表达抑制AKT/GSK-3β/m TOR信号通路,从而促进人肝癌细胞系的凋亡,抑制细胞的侵袭、迁移及增殖。
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