人参桑椹改善骨质疏松健康产品及作用机制的研究

来源 :长春中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lixin200513137149
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目的:骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是高发病,并且趋于年轻化。现代中药对于改善OP有不错的治疗价值,并且相较于西药副作用低。本文针对炮制中“相反为制”理论探索桑椹制人参的炮制工艺,以及对于炮制品改善OP有效成分的提取优化;通过网络药理学、分子对接技术研究人参桑椹治疗OP的关键靶点,同时结合细胞实验验证药物对治疗OP的疗效。为开发新中药复方制剂提供科学依据。方法:采用响应面技术优化炮制工艺,筛选最佳的炮制方法;其炮制品通过响应面法筛选能改善OP有效成分最佳的提取工艺方法;应用Cytoscape软件构建“成分-靶标-通路”网络图,应用分子对接技术探索人参桑椹药物活性成分与关键靶点结合力;通过细胞生物学等相关实验验证人参桑椹炮制品及单味药不同极性组分对睾丸间质细胞和成骨细胞增殖、分化、矿化、相关基因表达的影响。结果:响应面法优化后的炮制工艺条件为:蒸制时间为9h,蒸制温度90℃,烘干时间5h,烘干温度50℃;运用响应面法对桑椹制人参炮制品对改善OP有效成分提取工艺方法进行优化,得到最佳提取工艺为:料液比1∶46、提取时间61min、提取次数2次;应用网络药理学方法,针对人参桑椹活性成分,通过检索TCMSP数据库筛选出人参桑椹共有活性成分28种。通过检索Gene Cards数据库、OMIM数据库获得OP相关靶点4204个,药物疾病共有相关69个关键靶点。网络拓扑参数分析筛选出排名前四位的活性成分kaempferol、quercetin、beta-sitosterol与前四位关键靶点IL6、ALB、MAPK8、CASP3进行分子对接;进行细胞生物学实验进行细胞增殖率、睾酮分泌量、碱性磷酸酶活力和茜素红染色矿化及基因表达水平表明人参桑椹炮制品对补肾及成骨分化和矿化以及基因表达均具有促进作用。结论:通过响应面法筛选出最佳炮制工艺以及其最佳提取方法;网络药理学预测人参-桑椹可能是通过IL6、ALB、MAPK8、CASP3等关键作用靶点治疗OP,且分子对接表明靶点与成分之间有很好的结合能;人参桑椹炮制后活性强于人参桑椹单独用药的活性,为中药炮制改善OP奠定基础;为后续的开发提供科学依据。
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