【摘 要】
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目的:对蜜环菌菌丝液体摇瓶发酵工艺进行研究,优化其菌丝体生长、繁殖所需的营养和环境条件;测定蜜环菌不同发育形态的化学成分含量,为其质量评价奠定基础;研究蜜环菌及其发酵产物对高尿酸血症小鼠的降尿酸作用,探究其降尿酸的作用机制。方法:以菌丝胞内多糖含量与菌丝体干物质量为指标,通过单因素考察和正交试验优化蜜环菌液体摇瓶发酵工艺,确定碳源、氮源、微量元素及其比例;培养时间、接种量和初始p H值。利用紫外-
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目的:对蜜环菌菌丝液体摇瓶发酵工艺进行研究,优化其菌丝体生长、繁殖所需的营养和环境条件;测定蜜环菌不同发育形态的化学成分含量,为其质量评价奠定基础;研究蜜环菌及其发酵产物对高尿酸血症小鼠的降尿酸作用,探究其降尿酸的作用机制。方法:以菌丝胞内多糖含量与菌丝体干物质量为指标,通过单因素考察和正交试验优化蜜环菌液体摇瓶发酵工艺,确定碳源、氮源、微量元素及其比例;培养时间、接种量和初始p H值。利用紫外-可见分光光度法测定蜜环菌三种不同发育形态总多糖、总蛋白及总三萜含量;利用HPLC法测定蜜环菌三种不同发育形态麦角甾醇、麦角甾酮、腺苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、腺嘌呤含量。采用氧嗪酸钾（PO）和次黄嘌呤（HX）联合造模的方式,建立高尿酸血症小鼠模型,分组,灌胃给予蜜环菌子实体、蜜环菌菌索、蜜环菌发酵液,给药两周,处死,收集血清与肾脏器,试剂盒检测血清尿酸（SUA）、肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）含量;HE染色法观察肾组织病理切片;Western blot分析有机阴离子转运蛋白1（OAT1）和有机阴离子转运蛋白3（OAT3）含量,探讨蜜环菌及其发酵产物对高尿酸血症小鼠的降尿酸作用及其作用机制。结果:蜜环菌菌丝摇瓶发酵培养最优工艺为:葡萄糖2%、蚕蛹粉5%、KH2PO4 0.3%、Mg SO4 0.15%,最适初始p H值为6.0,最佳接种量为5%、最佳培养时间为11d。蜜环菌菌丝生长状态良好,菌丝体干物质量达到1.05g·100m L-1,胞内多糖含量达到10.23mg·100m L-1。化学成分含量测定结果:蜜环菌子实体总多糖含量19.04mg·g-1、总蛋白含量102.01mg·g-1、总三萜含量15.05mg·g-1、麦角甾醇含量1000.71μg·g-1、麦角甾酮含量5.24μg·g-1、腺苷含量527.69μg·g-1、次黄嘌呤含量1001.87μg·g-1、黄嘌呤含量807.87μg·g-1、腺嘌呤含量113.12μg·g-1;蜜环菌菌丝体总多糖含量9.39mg·g-1、总蛋白含量101.40mg·g-1、总三萜含量31.14mg·g-1、麦角甾醇含量944.48μg·g-1、麦角甾酮含量4.89μg·g-1、腺苷含量78.54μg·g-1、次黄嘌呤含量1111.57μg·g-1、黄嘌呤含量1368.71μg·g-1、腺嘌呤含量92.18μg·g-1;蜜环菌菌索总多糖含量21.71mg·g-1、总蛋白含量40.72mg·g-1、总三萜含量3.43 mg·g-1、麦角甾醇含量357.69μg·g-1、麦角甾酮含量5.91μg·g-1、腺苷含量83.58μg·g-1、次黄嘌呤含量25.81μg·g-1、黄嘌呤含量59.09μg·g-1、腺嘌呤含量36.34μg·g-1。小鼠高尿酸血症实验证明,蜜环菌及其发酵产物能够有效降低小鼠体内尿酸含量,其作用机制是通过上调肾组织中OAT1/OAT3蛋白的表达水平,促进尿酸从血液中转运到肾小管细胞中,再通过肾小管排泌,最后经过尿液排出体外。结论:优化后的蜜环菌发酵工艺可以为其工业化生产和开发利用提供理论依据;对蜜环菌不同发育形态相关化学成分含量的测定和分析,为其质量评价研究提供依据;蜜环菌及其发酵产物对高尿酸血症具有治疗功效,其机制是通过上调OAT1/OAT3的表达水平,进而促进尿酸在肾脏中的代谢,最后随尿液排出体外。
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