原发性肝癌是全球第四大常见的癌症死亡病因,每年约有80万人死于肝癌。手术切除、肝移植、肝动脉化疗栓塞术（TACE）和射频消融等手段对部分早期肝癌患者的效果较好,但整体的治疗效果仍十分有限。肝癌的发生和发展是一个多步骤的过程,目前对肝癌发生发展的确切分子机制仍知之甚少。乙肝病毒（HBV）感染是我国肝癌发病最主要的危险因素,其表达产物HBx在肝癌的发生发展中起着关键的作用。HBx具有反式激活的功能,能够通过调控细胞信号转导、病毒复制转录、细胞周期进程、细胞增殖与凋亡和肝细胞的遗传稳定性等方式促进肝癌的发生发展,但具体机制目前仍不是很清楚。BRF1是转录因子ⅢB的一个亚基,能够调控RNA聚合酶Ⅲ（PolⅢ）依赖性基因的转录,PolⅢ依赖性基因是胚胎发育、细胞增殖转化和肿瘤形成的必备条件。近年来BRF1被认为是一种促癌基因,在乳腺癌、前列腺癌、胃癌和肝癌等恶性肿瘤中被上调表达,并促进细胞转化及肿瘤的生长。BRF1高表达促进肝癌的发展,从而降低肝癌患者的生存时间,肝癌中BRF1高表达与肝癌患者的生存期呈负相关。前期研究中我们发现HBV感染能上调BRF1表达,然而BRF1在乙肝相关的肝癌中所起的作用及其机制还尚不清楚。因此,本研究拟在肝癌细胞中探索HBx蛋白对BRF1的表达调控,并深入研究HBx和BRF1的交互作用在乙肝相关肝癌发生发展中的作用机制。我们首先通过检测稳定整合HBV基因组的HepG2-N10细胞和HBV转基因小鼠肝脏中BRF1的表达水平,发现HBV能够促进BRF1在肝细胞中表达上调。随后我们鉴定了细胞内诱导BRF1表达上调的关键病毒蛋白,我们发现瞬时和稳定表达病毒蛋白HBx均可在转录水平和蛋白水平上诱导BRF1表达。为了进一步探究HBx上调BRF1表达的分子机制,我们发现HBx作用于BRF1启动子来提高BRF1的转录水平从而上调BRF1的表达。同时,我们利用免疫荧光实验证实HBx与BRF1在肝癌细胞中存在共定位的现象。我们在临床肝癌标本中发现HBx和BRF1在肝癌中共同高表达,它们在癌中的表达水平显著高于癌旁,并且存在共定位的现象。在肝癌细胞中,过表达HBx能够显著促进肝癌细胞生长增殖。在HBx转基因鼠中,我们发现HBx可诱发小鼠产生肝癌,鼠肝癌中BRF1表达水平显著高于癌旁。接着我们进一步探究HBx是否通过上调BRF1转录因子来促进肝癌细胞的增殖和转化。我们成功获得了有效沉默肝癌细胞中BRF1表达的siRNA和sgRNA,通过细胞增殖、集落形成和划痕实验测定BRF1表达下调对肝癌细胞生长转化和迁移情况的影响。我们发现BRF1表达水平降低后,肝癌细胞的生长明显受到抑制,集落形成能力和迁移能力显著降低。我们接着在沉默BRF1的肝癌细胞中评估过表达HBx对肝癌细胞生长增殖能力的影响,结果发现BRF1敲低后HBx促进肝癌细胞生长增殖能力显著降低,提示我们HBx通过上调BRF1来促进肝癌细胞生长增殖。后续我们还将对乙肝相关肝癌中HBx调控BRF1的致病机制作进一步的研究。综上所述,我们发现HBx是诱发乙肝相关肝癌的重要因素,HBx可在转录水平和蛋白水平上调BRF1表达来促进肝癌细胞的增殖和转化。通过靶向BRF1能有效降低肝癌细胞增殖和迁移能力。上述研究结果将为我们揭示HBx在乙肝相关肝癌中致癌机制,为我们研究乙肝相关肝癌的靶向药物提供思路和指导。