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目的:1)评估Spectralis HRA+OCT(OCTA)测量豚鼠脉络膜血流灌注(Choroidal blood perfusion,ChBP)和脉络膜厚度(Choroidal thickness,ChT)的可靠性及自编豚鼠OCTA图像处理程序的重复性,明确它们是否可以作为研究豚鼠ChBP和ChT的工具;2)观察在豚鼠近视模型中ChBP和ChT的变化,及ChBP、ChT和屈光(refraction)之间的相关性以及人眼在近视诱发因素(调节)作用下ChBP和ChT的变化,明确ChBP和ChT是否参与了近视的发生发展;3)通过给予形觉剥夺豚鼠球旁注射血管扩张药物,进一步验证ChBP对近视发生发展的作用;4)探究豚鼠脉络膜中是否存在收缩蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和肌间线蛋白(Desmin),及它们在脉络膜的分布情况,为近视的机制研究提供理论基础。
方法:1)评估OCTA测量豚鼠ChBP和ChT的可靠性:通过两个损伤脉络膜血液循环的实验来证实。一是通过颈椎脱臼的方法使豚鼠脉络膜血流信号消失,二是通过切断颞侧部分睫状动脉的方法使颞侧象限脉络膜血流部分减少,保留鼻侧象限血流完整。分别于颈椎脱臼及睫状动脉切断前后测量ChBP和ChT,用自编豚鼠OCTA图像处理程序处理图像,然后对数据进行统计分析,评估OCTA是否可以检测出处理前后ChBP和ChT的变化,明确OCTA是否可以用于测量豚鼠ChBP和ChT;评估豚鼠OCTA图像处理程序的重复性:可以熟练应用OCTA图像处理程序的两位人员,每人对形觉剥夺性近视组(form deprivation myopia,FDM)所有图片均处理两遍,评估组内和组间的重复性。2)OCTA测量豚鼠自发性近视(Spontaneous myopia)、形觉剥夺性近视(form deprivation myopia,FDM)和镜片诱导性近视(lens-induced myopia,LIM)及去除形觉剥夺头套(R-FDM)或负度数/平光诱导镜片(R-LIM/R-Plano)恢复4天的ChBP和ChT,观察ChBP和ChT的变化,并进行相关性分析,评估ChBP、ChT及屈光之间的相关性;调节实验:招募在校大学生为受试者。在OCTA仪器的左侧搭建Badal系统,并通过Badal系统依次给予受试者右眼0D、6D的调节刺激,OCTA测量左眼,比较在0D和6D刺激下ChBP和ChT的变化。3)给予豚鼠形觉剥夺眼球旁注射血管扩张药物哌唑嗪(10μM)增加脉络膜血流,用药2周后测量屈光、眼轴、ChBP和ChT,并与对侧眼及溶剂组比较,评估豚鼠屈光、眼轴、ChBP和ChT的变化。4)采用豚鼠心脏灌注染料DiI的方法标记脉络膜血管内皮,然后取材固定,脉络膜铺片,特异性一抗分别标记α-SMA和Desmin,双光子显微镜拍片,观察脉络膜中是否含有α-SMA和Desmin及其分布情况。
结果:1)OCTA测量豚鼠ChBP和ChT的可靠性:颈椎脱臼组:与脱臼前相比,脱臼后ChBP和ChT显著减少(ChBP:脱臼前39.70±7.12×103versus脱臼后0.34±0.10×103,P<0.001;ChT:脱臼前65.42±10.41μm versus脱臼后34.77±10.02μm,P<0.001);颞侧部分睫状动脉切断组:与术前相比,术后颞侧象限ChBP和ChT显著减少(ChBP:术前9.43±2.44×103versus术后3.16±2.71×103,P<0.001;ChT:术前77.08±19.13μm versus术后57.34±22.05μm,P<0.01),而鼻侧象限ChBP和ChT没有明显变化(ChBP:术前9.15±3.15×103versus术后9.51±3.19×103,P=0.66;ChT:术前72.74±26.49μm versus术后72.79±27.48μm,P=0.99);自编豚鼠OCTA图像处理程序的重复性:组内及组间比较均有较高的重复性,统计分析显示R值为0.97~0.99,P<0.001。2)自发性近视组:与对照组相比,自发性近视组ChBP和ChT显著减少(ChBP:对照组34.30±5.56×103versus自发性近视组23.35±5.58×103,P<0.001;ChT:对照组67.06±10.26μm versus自发性近视组50.15±9.30,P<0.01);FDM组:与对侧眼(Fellow)相比,FDM眼ChBP和ChT均显著减少(ChBP:Fellow37.87±6.37×103versus FDM30.27±6.06×103,P<0.001;ChT:Fellow76.13±9.34μm versus FDM64.76±11.15μm,P<0.001);去除形觉剥夺头套4天后,ChBP和ChT均显著增加(ChBP:FDM30.27±6.06×103versus R-FDM37.41±6.11×103,P<0.001;ChT:FDM64.76±11.15μm versus R-FDM77.94±12.57μm,P<0.001);LIM组:与对侧眼相比,ChBP和ChT均显著减少(ChBP:Fellow41.06±5.32×103versus LIM35.08±5.58×103,P<0.001;ChT:Fellow72.17±10.04μm versus LIM64.00±9.58μm,P<0.001);去除诱导镜片4天后,ChBP和ChT均显著增加(ChBP:LIM35.08±5.58×103versus R-LIM38.36±3.05×103,P<0.01;ChT:LIM64.00±9.58μm versus R-LIM71.99±7.62μm,P<0.001);用左右眼间的差值对ChBP、ChT及屈光进行相关性分析,显示它们呈显著正相关:FDM:ChBP和ChT(R=0.71,P<0.001),AXL和屈光(R=-0.58,P<0.001),ChBP和屈光(R=0.57,P<0.001),ChT和屈光(R=0.46,P<0.01);LIM:ChBP和ChT(R=0.53,P<0.001),AXL和屈光(R=-0.75,P<0.001),ChBP和屈光(R=0.36,P<0.001),ChT和屈光(R=0.35,P<0.01);调节实验结果:与0D调节刺激相比,6D调节刺激引起ChBP和ChT均显著减少(ChBP:0D67.08±3.00%versus6D65.90±2.99%,P<0.01;ChT:0D290.58±56.38μm versus6D284.82±56.69μm,P<0.01)。3)增加血流结果:屈光:与溶剂组相比,哌唑嗪组可以显著抑制屈光向近视方向发展(溶剂组-5.98±2.22D versus哌唑嗪-3.26±2.22D,P<0.05);眼轴:与溶剂组相比,哌唑嗪组可以显著抑制眼轴延长(溶剂组0.19±0.07mm versus哌唑嗪0.12±0.06mm,P<0.05);ChBP:与溶剂组相比,10μM哌唑嗪组ChBP显著增加(溶剂组32.75±6.53×103versus哌唑嗪组40.13±8.02×103,P<0.05);ChT:与溶剂组相比,10μM哌唑嗪组ChT显著增厚(溶剂组55.71±11.45μm versus哌唑嗪组67.63±11.16μm,P<0.05)。4)脉络膜中富含收缩蛋白α-SMA和Desmin,且主要围绕血管分布
结论:OCTA可以用来测量豚鼠ChBP和ChT;ChBP参与了近视的发生发展过程,ChBP减少可能是近视发生发展的一个原因;增加ChBP,可以抑制近视进展;豚鼠脉络膜中富含收缩蛋白α-SMA和Desmin,提示它们在调控ChBP方面可能起到一定作用。
方法:1)评估OCTA测量豚鼠ChBP和ChT的可靠性:通过两个损伤脉络膜血液循环的实验来证实。一是通过颈椎脱臼的方法使豚鼠脉络膜血流信号消失,二是通过切断颞侧部分睫状动脉的方法使颞侧象限脉络膜血流部分减少,保留鼻侧象限血流完整。分别于颈椎脱臼及睫状动脉切断前后测量ChBP和ChT,用自编豚鼠OCTA图像处理程序处理图像,然后对数据进行统计分析,评估OCTA是否可以检测出处理前后ChBP和ChT的变化,明确OCTA是否可以用于测量豚鼠ChBP和ChT;评估豚鼠OCTA图像处理程序的重复性:可以熟练应用OCTA图像处理程序的两位人员,每人对形觉剥夺性近视组(form deprivation myopia,FDM)所有图片均处理两遍,评估组内和组间的重复性。2)OCTA测量豚鼠自发性近视(Spontaneous myopia)、形觉剥夺性近视(form deprivation myopia,FDM)和镜片诱导性近视(lens-induced myopia,LIM)及去除形觉剥夺头套(R-FDM)或负度数/平光诱导镜片(R-LIM/R-Plano)恢复4天的ChBP和ChT,观察ChBP和ChT的变化,并进行相关性分析,评估ChBP、ChT及屈光之间的相关性;调节实验:招募在校大学生为受试者。在OCTA仪器的左侧搭建Badal系统,并通过Badal系统依次给予受试者右眼0D、6D的调节刺激,OCTA测量左眼,比较在0D和6D刺激下ChBP和ChT的变化。3)给予豚鼠形觉剥夺眼球旁注射血管扩张药物哌唑嗪(10μM)增加脉络膜血流,用药2周后测量屈光、眼轴、ChBP和ChT,并与对侧眼及溶剂组比较,评估豚鼠屈光、眼轴、ChBP和ChT的变化。4)采用豚鼠心脏灌注染料DiI的方法标记脉络膜血管内皮,然后取材固定,脉络膜铺片,特异性一抗分别标记α-SMA和Desmin,双光子显微镜拍片,观察脉络膜中是否含有α-SMA和Desmin及其分布情况。
结果:1)OCTA测量豚鼠ChBP和ChT的可靠性:颈椎脱臼组:与脱臼前相比,脱臼后ChBP和ChT显著减少(ChBP:脱臼前39.70±7.12×103versus脱臼后0.34±0.10×103,P<0.001;ChT:脱臼前65.42±10.41μm versus脱臼后34.77±10.02μm,P<0.001);颞侧部分睫状动脉切断组:与术前相比,术后颞侧象限ChBP和ChT显著减少(ChBP:术前9.43±2.44×103versus术后3.16±2.71×103,P<0.001;ChT:术前77.08±19.13μm versus术后57.34±22.05μm,P<0.01),而鼻侧象限ChBP和ChT没有明显变化(ChBP:术前9.15±3.15×103versus术后9.51±3.19×103,P=0.66;ChT:术前72.74±26.49μm versus术后72.79±27.48μm,P=0.99);自编豚鼠OCTA图像处理程序的重复性:组内及组间比较均有较高的重复性,统计分析显示R值为0.97~0.99,P<0.001。2)自发性近视组:与对照组相比,自发性近视组ChBP和ChT显著减少(ChBP:对照组34.30±5.56×103versus自发性近视组23.35±5.58×103,P<0.001;ChT:对照组67.06±10.26μm versus自发性近视组50.15±9.30,P<0.01);FDM组:与对侧眼(Fellow)相比,FDM眼ChBP和ChT均显著减少(ChBP:Fellow37.87±6.37×103versus FDM30.27±6.06×103,P<0.001;ChT:Fellow76.13±9.34μm versus FDM64.76±11.15μm,P<0.001);去除形觉剥夺头套4天后,ChBP和ChT均显著增加(ChBP:FDM30.27±6.06×103versus R-FDM37.41±6.11×103,P<0.001;ChT:FDM64.76±11.15μm versus R-FDM77.94±12.57μm,P<0.001);LIM组:与对侧眼相比,ChBP和ChT均显著减少(ChBP:Fellow41.06±5.32×103versus LIM35.08±5.58×103,P<0.001;ChT:Fellow72.17±10.04μm versus LIM64.00±9.58μm,P<0.001);去除诱导镜片4天后,ChBP和ChT均显著增加(ChBP:LIM35.08±5.58×103versus R-LIM38.36±3.05×103,P<0.01;ChT:LIM64.00±9.58μm versus R-LIM71.99±7.62μm,P<0.001);用左右眼间的差值对ChBP、ChT及屈光进行相关性分析,显示它们呈显著正相关:FDM:ChBP和ChT(R=0.71,P<0.001),AXL和屈光(R=-0.58,P<0.001),ChBP和屈光(R=0.57,P<0.001),ChT和屈光(R=0.46,P<0.01);LIM:ChBP和ChT(R=0.53,P<0.001),AXL和屈光(R=-0.75,P<0.001),ChBP和屈光(R=0.36,P<0.001),ChT和屈光(R=0.35,P<0.01);调节实验结果:与0D调节刺激相比,6D调节刺激引起ChBP和ChT均显著减少(ChBP:0D67.08±3.00%versus6D65.90±2.99%,P<0.01;ChT:0D290.58±56.38μm versus6D284.82±56.69μm,P<0.01)。3)增加血流结果:屈光:与溶剂组相比,哌唑嗪组可以显著抑制屈光向近视方向发展(溶剂组-5.98±2.22D versus哌唑嗪-3.26±2.22D,P<0.05);眼轴:与溶剂组相比,哌唑嗪组可以显著抑制眼轴延长(溶剂组0.19±0.07mm versus哌唑嗪0.12±0.06mm,P<0.05);ChBP:与溶剂组相比,10μM哌唑嗪组ChBP显著增加(溶剂组32.75±6.53×103versus哌唑嗪组40.13±8.02×103,P<0.05);ChT:与溶剂组相比,10μM哌唑嗪组ChT显著增厚(溶剂组55.71±11.45μm versus哌唑嗪组67.63±11.16μm,P<0.05)。4)脉络膜中富含收缩蛋白α-SMA和Desmin,且主要围绕血管分布
结论:OCTA可以用来测量豚鼠ChBP和ChT;ChBP参与了近视的发生发展过程,ChBP减少可能是近视发生发展的一个原因;增加ChBP,可以抑制近视进展;豚鼠脉络膜中富含收缩蛋白α-SMA和Desmin,提示它们在调控ChBP方面可能起到一定作用。