雪花莲凝集素基因转化菊花及转基因植株抗蚜性研究

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dsf922
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以菊花(Dendranthema morifolium (Ramat.) Tzvel.)叶片为外植体,用携带有雪花莲凝集素基因的农杆菌进行基因转化的研究,获得了转雪花莲凝集素基因菊花。对影响农杆菌介导菊花遗传转化的关键因素进行了优化,并对转基因植株的抗蚜性进行了研究。本实验共获得93个阳性克隆,最高转化率为11.21%。对部分转基因植株进行PCR检测及实时荧光定量PCR检测分析,结果表明目的基因已整合到菊花基因组中。抗蚜实验表明:转基因植株对蚜口密度增长有一定的抑制作用,转基因菊花离体叶片和整株幼苗的平均蚜口密度抑制率分别为38.6%和39.4%。本研究表明:在影响根癌农杆菌介导转化的众多因素当中,农杆菌和外植体细胞良好的生长状态是保证转化成功的关键。用YEB-1培养基活化农杆菌,培养至OD600为0.4时用于侵染,可得到较高的转化率;选用45天苗龄的试管苗,取其中部较大的叶片,在分化培养基中进行1天的预培养,可提高其对农杆菌的感受力,从而得到较高的转化率。在转化过程中,侵染时间为5分钟,共培养时间为4天,温度在26℃~28℃之间,为最佳转化条件,可使转化率由6.89%提高到11.21%。根据转基因植株对蚜口密度增长的抑制作用,以及其叶片提取液的凝血活性,初步说明雪花莲凝集素基因得到了表达。
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